渴望和盼望的区别:茶 咖啡碱测定
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茶 咖啡碱测定
Tea—Determination of caffeine content
GB/T8312—2002(eqv ISO107272:1995)代替GB/T8312—1987
1 范围
本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。
本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。
2 引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T8302—2002 茶 取样
GB/T8303—2002 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定
第一法 高效液相色谱法
3 原理
茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后,经高效液相色谱仪、C18分离柱、紫外检测器检测,与标准系列比较定量。
4 仪器和用具
实验室常规仪器及下列各项:
4.1 高效液相色谱仪。
4.2 紫外检测器:检测波长280nm。
4.3 分析柱:C18(ODS柱)。
4.4 分析天平:感量0.0001g。
5 试剂和溶液
甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水。
5.1 氧化镁:分析纯。
5.2 高效液相色谱流动相:取600mL甲醇倒入1400mL重蒸馏水,混匀,脱气。
5.3 咖啡碱标准液:称取125mg咖啡碱(纯度不低于99%)加乙醇:水(1:4)溶解,定容至250mL。使用时,待标准液至室温后,取2mL加水至100mL作为工作液。
6 操作方法
6.1 取样
按GB/T8302的规定。
6.2 试样制备
按GB/T8303的规定。
6.3 测定步骤
6.3.1 试液制备
称取1.0g(准确至0.0001g)磨碎茶样(6.2),置于500mL烧瓶中,加4.5g氧化镁及300mL沸水,于沸水浴中加热,浸提20min(每隔5min摇动一次),浸提完毕后立即趁热减压过滤,滤液移入500mL容量瓶中,冷却后,用水定容至刻度,混匀。取一部分试液,通过0.45μm滤膜过滤,待用。
6.3.2 色谱条件
6.3.2.1 检测波长:紫外检测器,波长280nm。
6.3.2.2 流动相:水:甲醇的体积分数为7:3。
6.3.2.3 流速:0.5mL/min~1.5mL/min。
6.2.2.4 柱温:40℃。
6.2.2.5 进样量:10μL~20μL。
6.3.3 测定
准确汲取制备液(6.3.1)10μL~20μL,注入高效液相色谱仪,并用咖啡碱标准液(5.3)制作标准曲线,进行色谱测定。
7 结果计算
7.1 计算方法
比较试样和标准样的峰面积,按式(1)计算:
式中:C1——测定液中咖啡碱含量,μg;
L1——样品总体积,mL;
L2——进样体积,μL;
M1——试样的质量,g;
m1——试样干物质含量,%。
如果符合重复性(7.2)的要求,取两次测定的算术平均值作为结果,结果保留小数点后一位。
7.2 重复性
同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.2g。
第二法 紫外分光光度法
8 原理
茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后,用特定波长测定其含量。
9 仪器和用具
实验室常规仪器及下列各项:
9.1 紫外分光光度仪。
9.2 分析天平:感量0.001g。
10 试剂和溶液
所用试剂应为分析纯(AR),水为蒸馏水。
10.1 碱式乙酸铅溶液:称取50g碱式乙酸铅,加水100mL,静置过夜,倾出上清液过滤。
10.2 盐酸:0.01mol/L溶液,取0.9mL浓盐酸,用水稀释1L,摇匀。
10.3 硫酸:4.5mol/L溶液,取浓硫酸250mL,用水稀释1L,摇匀。
10.4 咖啡碱标准液:称取100mg咖啡碱(纯度不低于99%)溶于100mL水中,作为母液,准确汲取5mL加水至100mL作为工作液(1mL含咖啡碱0.05mg)。
11 测定步骤
11.1 试液制备
称取3g(准确至0.001g)磨碎试样(6.2)于500mL锥形瓶中,加沸蒸馏水450mL,立即移入沸水浴中,浸提45min(每隔10min摇动一次)。浸提完毕后立即趁热减压过滤。滤液移入500mL容量瓶中,残渣用少量热蒸馏水洗涤2~3次,并将滤液滤入上述容量瓶中,冷却后用蒸馏水稀释至刻度。
11.2 用移液管准确吸取试液(11.1)10mL移入100mL容量瓶中,加入4mL0.01mol/L盐酸(10.2)和1mL碱式乙酸铅溶液(10.1),用水稀释至刻度,混匀,静置澄清过滤,准确吸取滤液25mL,注入50mL容量瓶中,加入0.1mL4.5mol/L硫酸溶液(10.3),加水稀释至刻度,混匀,静置澄清过滤。用10㎜比色杯,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。
11.3 咖啡碱标准曲线的制作
分别吸取0、1、2、3、4、5、6mL咖啡碱工作液(10.4)于一组25mL容量瓶中,各加入1.0mL盐酸(10.2),用水稀释至刻度,混匀,用10mm石英比色杯,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。
12 结果计算
茶叶中咖啡碱含量以干态质量分数表示,按式(2)计算:
式中:C2——根据试样测得的吸光度(A),从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,mg/mL;
L3——试液总量,mL;
M2——试样用量,g;
m2——试样干物质含量,%。
如果符合重复性(7.2),取两次测定的算术平均值作为结果,保留小数点后一位。