美国婚介:荧光二抗—新型DyLight 488绿色荧光

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是一种绿色荧光团，在免疫学实验里，经常被用于荧光团标记到相应的检测分子，如抗体上。FITC的纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为 490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。由于FITC是小分子化合物，每一个抗体可标记几个FITC分子，IgM通常用小分子的荧光素标记，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。

我们知道，FITC的绿色荧光强度肉眼观察已经很亮了，但是从上面的图可见，与Cy2相比还是偏弱，而DyLight 488则更胜一筹。DyLight是一种新型的荧光分子，与传统的荧光团如FITC、Rhodamine、Texas Red等相比，具有更强的荧光强度、更高的光学稳定性以及特异性等。同时，DyLight种类齐全，如Dylight 405就是蓝色荧光，Dylight 488是绿色荧光，可完全替代FITC；完全替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549；替代Texas Red的Dylight 594；Dylight 633和Dylight 649则是更强的红色荧光；另外，Dylight还有适配Odyssey系统的近红外和远红外二抗，分别是Dylight 680和DyLight 800。

FITC本身性质稳定，能与蛋白质结合，是检测组织细胞内蛋白质最常用的荧光探针。它还能标记抗体，可用于免疫组织化学单染或多重染色。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。缺点是在光照下 易淬灭，易受自发荧光影响。实际上，FITC的最大缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。DyLight 488则完全不一样，如右图所示，不同荧光团在含有抗淬灭剂（90%甘油的PBS）里的荧光淬灭情况，由图可见。FITC的淬灭最快，Cy2其次，而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光稳定性。因此DyLigt非常适合荧光拍照。那么Dylight到底是一种什么样的荧光团？不管在结构以及功能和应用上，Dylight都是一种新的荧光团，与传统的荧光团相比，其分子量相对较小， 因此一个大分子上可以标记更多的Dylight，同时单个的Dylight荧光团，其荧光强度更强，特异性更好；Dylight对光更稳定，这意味着其具 有更高的抗淬灭性，不像FITC因为快速发生淬灭而无法及时捕捉到荧光图像。
   可能还需要考虑的一个问题是价格的问题，其实Dylight的荧光二抗与常规荧光二抗相比，具有更高的性价比，一般来说，Dylight的价格比常规二抗 只高50%左右，但是Dylight的效价通常是常规荧光二抗的2-4倍左右，因此就最终的性价比，Dylight更胜一筹。举例来说，EarthOx的 FITC标记的山羊抗小鼠IgG二抗（货号为E031210），100μl和500μl报价分别是￥160和￥640；而相应的EarthOx的 Dylight 488标记的山羊抗小鼠IgG二抗（货号为E032210），100μl和500μl报价分别是￥240和￥960，但是在具体使用时，比如免疫荧光实 验，其推荐稀释比率分别为1:100和1:400，即100μl和500μl的FITC标记山羊抗小鼠IgG二抗（货号为E031210）最终使用液是 10ml和50ml，而100μl和500μl的Dylight 488标记山羊抗小鼠IgG二抗（货号为E032210）最终使用液是40ml和200ml，可见，即使不考虑Dylight更高的荧光强度、更好的光学 稳定性和特异性，但就价格来说，Dylight荧光二抗也具有更高的性价比。下图为EarthOx原装进口DyLight 488标记，针对不同种属的二抗产品，
     能为您提供全系列的Dylight原装进口荧光二抗，包括Jackson、KPL的大包装粉末形式的 Dylight荧光二抗，另外，也提供EarthOx的小包装液体形式Dylight荧光二抗，均具有很高的性价比。针对荧光标记二抗，有FITC、 TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗；按照检测物种分，有抗 人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、 IgG(ab’)2等不同类型抗体。