家里住上蝙蝠怎样抠赶:锌对仔猪及小肠上皮细胞免疫功能的调节作用

孙国君
【摘要】： 本研究以断奶仔猪和小肠上皮细胞(IPEC-J2)为试验模型,通过四个试验考察了锌对不同免疫状态下仔猪和小肠上皮细胞免疫功能的调节作用。 试验一日粮锌水平对仔猪生长性能和免疫功能的影响 本试验采用单因子设计,选用72头28日龄断奶的杂交仔猪(DLY),在基础日粮中分别添加0、60、120mg/kg锌(ZnSO_4),研究了日粮锌水平对断奶仔猪生长性能、组织锌含量、碱性磷酸酶活性、外周血淋巴细胞转化率、牛血清白蛋白(BSA)抗体水平、肝脏金属硫蛋白(MT)含量及MTmRNA水平的影响。试验全期共21天。试验结果表明:在本试验条件下,不同锌添加水平对断奶仔猪生长性能、组织锌含量、外周血淋巴细胞转化率、肝脏MT含量及MTmRNA水平无显著影响(P＞0.05);随日粮锌水平增加,仔猪血清碱性磷酸酶(AKP)活性极显著增加(P＜0.01),牛血清白蛋白(BSA)抗体水平在免疫后第7天,随日粮锌水平增加而显著降低(P＜0.05),在第14天则不受影响。研究结果证明,NRC(1998)推荐的锌水平可满足断奶仔猪最佳生长速度和免疫应答的需要。 试验二日粮锌水平和免疫应激对仔猪生长性能和免疫功能的影响 本试验采用2×3因子设计,(1)免疫应激处理(注射大肠杆菌脂多糖或生理盐水),(2)日粮类型(基础日粮中添加0、60、120mg/kg锌)。在试验的第7天,每日粮处理组随机选取半数仔猪按200μg/kg体重的剂量腹腔注射脂多糖(LPS),另一半注射同样剂量的生理盐水。试验全期共21天。注射LPS后3h,每个重复选择1头猪采集血清,测定细胞因子白介素1(IL-1)和白介素2(IL-2)浓度。注射LPS后第2天,每个重复1头猪从前腔静脉采血测定外周血淋巴细胞转化率;另外选1头猪从耳后肌肉注射牛血清白蛋白(BSA),并于注射后第7和12天从前腔静脉采血,测定血清BSA抗体水平。试验结果表明:LPS刺激显著降低了仔猪注射后第一周的日增重和采食量(p＜0.01),但对饲料转化效率无影响。LPS刺激提高了外周血淋巴细胞转化率(p＜0.05)和血清IL-1浓度(p＜0.01),但未影响血清IL-2浓度和BSA抗体水平。在LPS刺激后第一周,随日粮锌水平增加,仔猪日增重有增加的趋势(p＜0.10),而采食量和饲料转化效率未受影响。随着锌水平提高,淋巴细胞转化率有增加趋势(p＜0.10)。日粮处理没有影响BSA抗体水平、血清IL-1、IL-2浓度。提示经历短期免疫应激的仔猪对锌的需要量要高于健康仔猪。 试验三锌和脂多糖对小肠上皮细胞(IPEC-J2)免疫功能的影响 肠上皮细胞在肠腔抵御病原体和细菌的先天性免疫应答中,起到了非常重要的作用。在本次试验中,我们以肠细胞因子IL-8、TNF-α和TGF-β的基因表达为反应标识,考察了锌和脂多糖(LPS)对猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2)免疫功能的影响。试验结果表明: 1.IPEC-J2细胞内锌含量随培养基锌浓度升高而增高。与普通培养基对照组(6μmol/L锌)相比较,50μmol/L和100μmol/L硫酸锌组细胞锌含量分别提高55.69%和98.75%,差异极显著(P＜0.01);50μmol/L和100μmol/L乙酸锌组细胞锌含量分别提高67.65%和116.58%(P＜0.01)。IPEC-J2细胞的ZnT1和MTmRNA表达随着培养基锌浓度升高而增高,与对照组相比差异均显著(P＜0.05);在培养基锌浓度为50μmol/L时,DMT1mRNA表达量达到峰值,显著高于对照组(P＜0.01),达到100μmol/L时,与培养基锌浓度50μmol/L相比较。DMT1mRNA表达水平有所下降,但仍高于对照组(P＜0.05)。 2.在脂多糖刺激下,与对照组相比较,细胞锌含量下降5.10%,而培养基锌浓度为50μmol/L和100μmol/L的硫酸锌组细胞锌含量分别提高27.36%和45.64%(P＜0.01);培养基锌浓度为50μmol/L和100μmol/L的乙酸锌组细胞锌含量分别提高26.11%和73.07%(P＜0.01)。LPS刺激对小肠上皮细胞ZnT1、DMT1和MTmRNA表达量均无显著影响(P＞0.05)。IPEC-J2细胞经内毒素刺激后,随培养液中锌浓度的增加,ZnT1mRNA(P＜0.01)和MTmRNA(P＜0.05)的表达显著提高。在培养基锌浓度为50μmol/L时,DMT1mRNA表达量达到最高峰,显著高于对照组(P＜0.01),锌浓度为100μmol/L时,与培养基锌浓度50μmol/L相比较,DMT1mRNA表达水平显著下降(P＜0.05),与对照组DMT1mRNA表达量相同。 3.培养液中不同锌源和锌水平没有影响细胞IL-8、TNF-α和TGF-β的基因表达水平。 4.LPS刺激可使IL-8(P＜0.01)和TNF-α(P＜0.05)的mRNA表达水平显著上调,TGF-β的mRNA表达水平显著下调(P＜0.01);且同对照组相比较,随着锌浓度的提高,IL-8、TNF-α和TGF-β基因表达量的增加(P＜0.05)。 试验四锌和环磷酰胺对小肠上皮细胞(IPEC-J2)免疫功能的影响 环磷酰胺是一种常用抗肿瘤药物,是常用免疫抑制剂。现已证明环磷酰胺通过降低抗体产量抑制B淋巴细胞的免疫功能,另外环磷酰胺也可促进TNF-α诱导的凋亡细胞死亡。为了探索锌和环磷酰胺对猪小肠上皮细胞免疫功能的影响,在本次试验中,我们以肠细胞因子IL-8、TNF-α和TGF-β的基因表达位反应标识,测定了锌和脂多糖(LPS)对猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2)免疫功能的影响。试验结果表明: 1.无论有无环磷酰胺刺激,IPEC-J2细胞内锌含量均随培养基锌浓度升高而增高。 2.在环磷酰胺作用下,细胞锌含量下降7.07%,而培养基锌浓度为50μmol/L和100μmol/L硫酸锌组细胞锌含量分别提高4.54%和39.91%(P＜0.01);培养基锌浓度为50μmol/L和100μmol/L乙酸锌组细胞锌含量分别提高7.92%和22.52%(P＜0.01)。与对照组比较,ZnT1mRNA表达量显著增加(P＜0.01),而DMT1和MTmRNA的表达量及显著降低(P＜0.01)。随着锌水平的提高,ZnT1和MTmRNA表达量显著提高(P＜0.01)。DMT1mRNA的表达量显著下降(P＜0.05)。 3.环磷酰胺刺激可使IL-8和TNF-α的基因表达量被显著下调(P＜0.05),而对TGF-β的基因表达量无影响。与对照组(环磷酰胺组)比较,硫酸锌水平提高,使IL-8mRNA的表达量显著升高(P＜0.01),而对TGF-β和TNF-α的基因表达量则影响不大,但随锌水平的增加,两者的mRNA表达水平有上调趋势;乙酸锌水平提高,使IL-8和TNF-α的基因表达量显著增加(P＜0.05)。 上述结果揭示,NRC(1998)推荐的锌水平可满足断奶仔猪最佳生长速度和免疫应答的需要。提示经历短期免疫应激的仔猪对锌的需要量要高于健康仔猪。锌对处于免疫应激状态下的小肠上皮细胞的免疫功能有调节作用。
【关键词】：免疫功能小肠上皮细胞仔猪锌
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：S828.5
【目录】： 中文摘要6-9
Abstract9-14
目录14-16
前言16-19
第一部分 文献综述19-46
1 锌的生物学功能19-25
1.1 锌与生长发育19-20
1.2 锌对免疫功能的影响20-25
2 锌吸收的分子机制研究进展25-31
2.1 体内锌平衡的调控25-26
2.2 锌在肠腔的吸收转运机制26-31
3 锌与肠道屏障功能31-37
3.1 肠粘膜上皮细胞的结构特点31-32
3.2 肠粘膜上皮细胞在粘膜免疫防御中的调节作用32-35
3.3 锌对肠粘膜免疫的影响35-37
4 猪免疫应激研究现状37-46
4.1 猪的免疫应激模型37-38
4.2 免疫应激对动物生理机能的影响38-46
第二部分 本研究的目的、内容、意义与技术路线46-48
第三部分 试验研究内容48-94
试验一 日粮锌水平对仔猪生长性能和免疫功能的影响48-59
1 试验设计48
2 材料与方法48-51
3 考察指标及测定方法51-53
4 数据统计分析53
5 试验结果与分析53-56
6 讨论56-58
7 小结58-59
试验二 日粮锌水平和免疫应激对仔猪生长性能和免疫功能的影响59-67
1 试验设计59
2 材料与方法59-61
3 考察指标及测定方法61
4 数据统计分析61
5 试验结果与分析61-63
6 讨论63-66
7 小结66-67
试验三 锌和脂多糖对小肠上皮细胞(IPEC-J2)免疫功能的影响67-83
1 试验设计67
2 材料与方法67-69
3 考察指标及测定方法69-72
4 数据统计分析72
5 试验结果与分析72-78
6 讨论78-82
7 小结82-83
试验四 锌和环磷酰胺对小肠上皮细胞(IPEC-J2)免疫功能的影响83-94
1 试验设计83
2 材料与方法83-84
3 考察指标及测定方法84-86
4 数据统计分析86
5 试验结果与分析86-91
6 讨论91-93
7 小结93-94
第四部分 总体讨论与结论及创新点94-99
1 总体讨论94-97
2 总体结论97-98
3 本研究的创新点98
4 有待进一步研究的问题98-99
参考文献99-117
致谢117-118
攻读博士学位期间发表及完成的论文118