偶看新闻为什么自古英雄出少年:单克隆抗体制备若干问题解答
来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/04/30 19:36:09
问题一：单克隆抗体与多克隆抗体有何区别？
单克隆抗体：指抗体形成细胞克隆所产生的抗体，即由一个细胞的后代所产生的针对一种它能识别的抗原决定簇的的专一性抗体。
多克隆抗体：指抗原入侵机体（由于抗原物质可能包含多种分子，当然有时即便是只含有一种分子也是由多种抗原决定簇组成的），刺激具有相应抗原受体的不同淋巴细胞增殖分化，而产生的多种抗血清抗体。
可见单克隆抗体与多克隆抗体的主要区别在于其抗体种类是否单一，而不是抗体数量的多少。
问题二：单克隆抗体制备流程中的“两次筛选”是如何进行的？
第一次筛选：
（1）筛选对象：脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞（即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液）。另有少量多细胞聚体，因寿命短而迅速死亡，故无需特别筛选。
（2）筛选方法：用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。（注意：HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路，而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。）
（3）筛选结果：脾-瘤细胞正常生长，其它细胞都会死亡。（析因：脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，虽有核酸合成的旁通路，但不能长期增殖；瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶，核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断，因核酸合成障碍而死亡；脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶，虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断，但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。）
第二次筛选：
（1）筛选对象：多克隆杂交瘤细胞群体。（即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。）
（2）筛选方法：抗体检测（ 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等，实际上是利用稀释法，在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养，然后检查每孔中产生特定抗体的能力）。
（3）筛选结果：产生专一性抗体的杂交瘤细胞。