偶看新闻奥格斯堡 点球:单克隆抗体的几个问题
来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/05/05 05:11:58
一 杂交瘤细胞的第二次筛选要进行抗体检测阳性！
1骨髓瘤细胞同效应B细胞融合后产生的细胞不一定可以分泌抗体，即该基因不一定会表达出来，所以要筛选出可以分泌抗体的杂交瘤细胞. 2杂交细胞有多种（被免疫生物B淋巴细胞又百万种）
单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。
第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。
其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。
对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。
第二次筛选的原理和方法： 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株。
如何进行抗体检测来筛选杂交瘤细胞
分别提出杂交瘤细胞产生的抗体,看能否和抗原形成杂交带
二 浆细胞（或者免疫的B淋巴细胞）与骨髓瘤细胞的融合
三 腹水怎么来的！ 多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的恶性肿瘤。单克隆恶性浆细胞(即骨髓瘤细胞)的大量增殖,侵犯骨髓与骨质，产生溶骨性改变；并影响骨髓的造血功能，导致贫血与出血。同时还产生大量单克隆免疫球蛋白，影响正常免疫球蛋白的生成，增加患者对细菌与病毒的易感性，由于免疫球蛋白或其多肽链亚单位（轻链）由尿中排出，常导致肾功能损害。
由于血浆中蛋白质含量的降低，引起水分大量进入到组织液中形成了腹水．
四 、杂交瘤的克隆化和冻存
克隆化一般是指将抗体阳性孔进行克隆化。经过HAT筛选后的杂交瘤克隆不能保证一个孔内只有一个克隆。在实际工作中，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞、抗体非分泌细胞；所需要的抗体特异性抗体分泌细胞和其它无关抗体分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开，就需要克隆化。
克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交克隆应尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌的细胞所抑制，因为抗体非分泌细胞的生长速度比抗体分泌的细胞生长速度快，二者竞争的结果会使抗体分泌的细胞丢失。即使克隆化过的杂交瘤细胞也需要定期的再克隆，以防止杂交瘤细胞的突变或染色体丢失，从而丧失产生抗体的能力。