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来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/04/28 23:47:25
血红蛋白测定(Hb)标准操作程序
血液检验SOP 2009-12-08 19:41:15 阅读200 评论1 字号：大中小 订阅
一.目的：规范血红蛋白测定标准操作
二.适用范围：适用于测定血红蛋白
三.支持性文件：全国临床检验操作规程第三版
四.原理：氰化高铁血红蛋白(HiCN)法
五.仪器：722s分光光度计
六.试剂：HiCN试剂的配法：
氰化钾 50mg
高铁氰化钾 200mg
无水磷酸二氢钾 140mg
Triton X-100 1.0ml
蒸馏水 加至1000ml 纠正pH至7．0～7．4
七.样本要求：静脉采血使用EDTA-K2抗凝。毛细血管采血应擦去第一滴血，以免混入组织液影响结果。标本采集完成放置5-10分钟后测定。
八.操作步骤：
1．取全血20ul，加到5ml HiCN试剂中。充分混匀，静置5min。
2．分光光度计(常规测定时带宽应小于6nm)，波长540nm处，光径(比色杯内径) 1．0cm，以HiCN试剂调零，测定吸光度(A)。查标准曲线求血红蛋白的含量。
血红蛋白(g／L)＝测定管吸光度X64458*251/44000＝测定管吸光度X367．7式中：①64458是目前国际公认的血红蛋白平均分子量。
②44000是1965年国际血液学标准化委员会(1CSH)公布的血红蛋白摩尔吸光度。
③251是稀释倍数。
3、标准曲线的制备：将市售的氰化高铁血红蛋白（HiCN）参考液稀释为四种浓度（200g/L,100g/L,50g/L,25g/L）然后以HiCN试剂调零。分别测定各自在540nm处的吸光度。以血红蛋白浓度为横坐标其对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
4.结果输入上海新和中文操作系统打印报告。
九.参考范围：
男：120—160g／L (12—16g／d1)
女：110～150g／L(11～15g／d1)
新生儿：170—200g／L(17—20g／d1)
十.注意事项：
1.HiCN试剂不能贮存于塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低。HiCN试剂应存放于4℃冰箱，但不能放0℃以下保存，因为结冰可引起高铁氰化钾还原，使试剂褪色失效。
2.不能将HiCN试剂分装于试管中，管口敞开又不避光放在室温中，甚至放置过夜。这样，会使HiCN试剂变质或丢失氰离子，影响测定准确性，不符合质量管理要求。
3.HiCN试剂是一种低离子强度而pH又近中性的溶液，遇到白细胞数过多或异常球蛋白增高的血标本，HiCN比色液会出现混浊。若因白细胞数过多引起的混浊，可离心后取上清液比色；若因球蛋白异常增高(如肝硬化患者)引起的混浊，可向比色液中加入少许固体氯化钠(约0．25g)或碳酸钾(约o．1g)，混匀后可使溶液澄清。
4.氰化钾是剧毒品，配试剂时要按剧毒品管理程序操作。配制好的HiCN试剂中因氰化钾含量低，又有高铁氰化钾存在，毒性不是很大。若进入体内，高铁氰化钾氧化血红蛋白，生成高铁血红蛋白。后者结合CN—，起到一定的解毒作用，但仍应妥善保管。测定后的HiCN比色液不能与酸性溶液混合(目前大都用流动比色，共用1个废液瓶，尤须注意这一点)，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氢氰酸气体。
5.若用分光光度计作精密定量测定，分光光度计的波长和吸光度需要校正，带宽应小于lnm，比色杯光径1．0cm，允许误差为0．5％(即0．995—1．005cm)，测定温度为20—25C。
6.HiCN参考液的纯度检查
(1)波长450～750nm的吸收光谱曲线形态应符合文献所述。
(2)540nm／504nm的吸光度比应为1．59～1．63。
(3)用HiCN试剂作空白，波长710—800nm处，比色杯光径1．000cm时，吸光度应小于0．002。
7.废液处理：为防止氰化钾污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中。①按每升HiCN废液加次氯酸钠溶液(安替福民) 40ml，充分振摇混匀，敞开容器，置室温3h。②如果没有安替福民，可用日用品“84”消毒液40ml代替，除毒效果基本相同。③碱性硫酸亚铁除毒：硫酸亚铁和KCN在碱性溶液中反应，生成无毒的亚铁氰化钾。取硫酸亚铁 (FeSO4·7H20)50g，氢氧化钠50g，加水至1000ml，搅匀制成悬液。每升HiCN废液，加上述碱性硫酸亚铁悬液40ml，不时搅匀，置3h后排入下水道。但除毒效果不如以上两种方法好