陶晶莹为什么当评委:植物亚细胞定位GFP表达载体的选择问题(页 1)

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植物亚细胞定位GFP表达载体的选择问题

请问做植物某个基因蛋白的亚细胞定位一般选用什么类型的GFP表达载体呢?哪些载体效果比较好？谢谢！急！

kobehaha 发表于 2009-9-22 14:38

植物载体,还真没做过...
帮顶一下

孤风逐日 发表于 2009-9-22 19:32

做植物这方面的螺友可能较少，一直没等到给楼主好的建议

buliang84 发表于 2009-9-22 21:50

:'(继续等待

darlingziyu 发表于 2009-9-23 14:19

如果要打洋葱或者做转化的话，普通的启动子载体（如pCAMBIA，pMDC系列）就可以做亚细胞定位（把GUS或者其他的报告基因换成GFP，保证读码框正确）；
如果要做原生质体转化，就要选择小一点的载体，象PM999，BiFC系列。
另外，亚细胞定位不一定非要GFP的，RFP/YFP/CFP等等都可以。

buliang84 发表于 2009-9-23 19:37

[b] [url=http://www.helixnet.cn/bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225707&ptid=25775]5#[/url] [i]darlingziyu[/i] [/b]
:lol 谢谢，你是不是有做过这方面的呀？
pCAMBIA1302是含有GFP 报告基因的，不过好像效果不好，。。不知道谁有pCAMBIA1302的载体？希望能够交换，谢谢啊！！我的 QQ是115635542

皮皮2008 发表于 2009-9-23 22:11

植物表达载体有pBI121 pBI221
我们实验室一个师姐以前构建过这个载体
把目的基因和GFP连在pBI121上
切掉了GUS
GFP在目的基因的下游

darlingziyu 发表于 2009-9-23 22:59

pCAMBIA1302中的gfp是mgfp。mgfp消除了GFP基因中的隐蔽性内含子，可以避免植物细胞的错误剪接。但是mgfp在改变了碱基成分后，荧光强度会变弱。
好像现在用的gfp一般都是egfp，增强了荧光强度的。
08年的诺贝尔化学奖就是发给了钱永健等三个人，以表彰他们在发现和推广gfp中做出的贡献，楼主可以关注一下哦。
[b] [url=http://www.helixnet.cn/bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225787&ptid=25775]6#[/url] [i]buliang84[/i] [/b]

buliang84 发表于 2009-9-24 20:29

[b] [url=http://www.helixnet.cn/bbs/redirect.php?goto=findpost&pid=225858&ptid=25775]8#[/url] [i]darlingziyu[/i] [/b]

:loveliness: 万分感谢！！！我多看些文献。。。

buliang84 发表于 2009-9-25 19:59

螺友们能不能给出具体是哪一种表达载体更适合植物基因亚细胞定位呀？？最近一直苦于没有表达载体无法后续工作:'(

wen0891 发表于 2009-9-27 23:10

双子叶用pBI121，pBI221，当然要自己把GFP连上去
单子叶就pCAMBIA系列，我们用3301，pGA1611应该也可以
主要是启动子不同，当然用拟南芥很简单了，玉米就很难了。

xuexiuhua 发表于 2009-9-28 22:48

我们实验室一般用pBI121，pCAMBIA1300和pCAMBIA1305
主要在拟南芥植株里做亚细胞定位

关于细胞的载体克隆载体和表达载体的定义植物细胞的胞间连丝植物细胞与动物细胞的区别动物细胞与植物细胞的区别 pET系列表达载体最小的植物细胞是什么？植物细胞的分化示意图什么是植物细胞的全能性? 为什么被切开的质粒转化入载体不能表达谁知道pET-32α表达载体的酶切图谱？植物转基因克隆载体的研究进展？急求！蛋白质亚细胞定位预测的意义是什么?他对蛋白质功能和蛋白质相互作用的预测起到什么样的影响? 植物细胞和动物细胞的细胞骨架有什么不同? 植物细胞与动物细胞共同具有的结构是什么？有没有一个细胞的植物植物的细胞为什么有液泡吗? 植物细胞全能性的条件不包括哪些？植物细胞是怎么分裂的？植物细胞表现出全能性的必要条件是什么导致植物细胞发生变化的原因导致植物细胞发生变化的原因? 保卫细胞与植物的关系植物细胞的质壁分离