免疫酶技术

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章节目录

• 目 录
• 序
• 一、绪言
• 二、专一性抗血清的制备
• Ⅰ．抗原及其纯化
• （一）抗原
• （二）抗原纯化的一般方法
• （三）植物病毒纯化的实例一长叶车前花叶病毒的纯化
• Ⅱ．机体的特异性免疫反应及生产抗血清的免疫程序
• （一）机体的免疫反应
• （二）生产抗血清的免疫程序
• Ⅱ．抗血清效价及其纯度测定
• （一）抗血清效价测定
• （二）抗血清纯度鉴定
• Ⅳ．植物病毒抗血清制备的实例
• （一）RMV单价抗血清的制备
• （二）RMV抗血清效价的测定
• （三）RMV抗血清纯度的测定
• 三、免疫球蛋白的制备
• Ⅰ．免疫球蛋白及其性质
• （一）免疫球蛋白的基本概念
• （二）免疫球蛋白的化学结构
• （三）免疫球蛋白的免疫学功能
• （四）免疫球蛋白的产生机理
• Ⅱ．免疫球蛋白的制备
• （一）饱和硫酸铵沉淀法
• （二）硫酸钠沉淀法
• （三）冷乙醇法
• （四）抗体碎片的制备
• Ⅲ．免疫球蛋白的效价、纯度与定量测定
• （一）免疫球蛋白的效价测定
• （二）免疫球蛋白的纯度鉴定
• （三）免疫球蛋白的定量测定
• Ⅳ．植物病毒抗血清免疫球蛋白的制备实例
• （一）饱和硫酸铵法粗提RMV抗血清中的免疫球
• 蛋白IgG
• （二）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的纯度鉴定
• （三）RMV抗血清免疫球蛋白IgG的效价测定
• 四、标记酶及其制备
• Ⅰ．作为标记抗体用的酶
• （一）作为标记抗体用的酶应具备的特点
• （二）现在国内外已用于免疫酶技术的酶
• Ⅱ．酶纯化的一般原理和方法
• Ⅲ．酶纯化的实例
• （一）辣根过氧化物酶及其制备
• （二）碱性磷酸酶的制备
• 五、酶标记抗体的制备
• I．酶与抗体的交联
• （一）交联方法简述
• （二）酶与IgG交联的原理
• （三）使酶与抗体结合的交联剂……………………………7…（四）酶标记抗体的纯化及保存
• Ⅱ．酶标记抗体制备的实例
• （一）戊二醛一步法交联辣根过氧化物酶与IgG
• （二）戊二醛一步法交联碱性磷酸酶与IgG
• （三）戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG
• （四）过碘酸氧化法交联辣根过氧化物酶与IgG
• （五）简易戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶与IgG
• （六）戊二醛―过碘酸钠法交联辣根过氧化物酶与
• IgG
• （七）苯二马来酰亚胺法交联半乳糖苷酶和抗体Ig的
• Fab
• （八）偶氮桥法交联碱性磷酸酶与IgG
• Ⅱ．酶标记抗体的定量及其克分子比值
• （一）酶标记抗体的定量
• （二）酶（HRP）标记抗体的克分子比值
• 六、酶底物的配备
• Ⅰ．酶底物的选择
• （一）在免疫酶技术中作为酶底物的条件
• （二）酶底物的选择
• （三）合理使用酶底物
• Ⅱ．酶底物的配备法
• （一）辣根过氧化物酶的底物配备法
• （二）碱性磷酸酶的底物配备法
• （三）葡萄糖氧化酶的底物配备法
• （四）β―D一半乳糖苷酶的底物配备法&9
• 七、免疫酶标固相载体方法
• Ⅰ．免疫酶技术的产生、发展、分类及其命名
• Ⅱ．免疫酶标固相载体方法
• （一）固相载体
• （二）酶联免疫吸附测定（ELISA）
• （三）ELISA应用实例
• （四）ELISA应用的一些说明
• （五）具有吸附能力的小球状物载体方法
• 八、免疫酶标组织化学方法
• Ⅰ．组织细胞内源过氧化物酶的抑制
• （一）抑制内源酶的重要性
• （二）酶抑制的一般概念
• Ⅱ．组织及组织内有关抗原的固定
• Ⅲ．标本的制备
• （一）撕剥表皮
• （二）徒手切片
• （三）涂抹法
• （四）压碎法&1
• （五）冰冻切片法
• （六）石蜡切片法
• Ⅳ．免疫酶标组织化学法原理及实验
• （一）免疫酶标组织化学法原理
• （二）免疫酶标组织化学直接法对青菜叶片（横切面）
• 内RMV的定位
• （三）免疫酶标组织化学间接法对青菜叶片（横切面）
• 内TuMV的定位
• （四）免疫酶标组织化学简便法对青菜下表皮内RMV
• 的检测
• 九、非标记免疫酶技术
• Ⅰ．“抗体搭桥”法
• （一）“抗体搭桥”法原理
• （二）混合抗体直接法实验程序
• （三）混合抗体间接法实验程序
• （四）“杂交抗体”法
• （五）扩大抗体法
• Ⅱ．PAP法
• （一）PAP法原理
• （二）PAP法一般程序
• （三）PAP的克分子比例
• （四）PAP最适实验浓度
• （五）讨论
• （六）PAP法对青菜叶片（冰冻切片）内RMV定位
• 的实例
• Ⅲ．非标记免疫酶固相载体方法
• 十、免疫酶电子显微镜技术
• Ⅰ．制备电子显微镜样品常识
• （一）电子显微镜技术中使用的标本支持物
• （二）超…切片
• Ⅱ．免疫酶标电镜技术
• （一）免疫酶标电镜技术的简要介绍
• （二）免疫酶标电镜技术的一般程序
• （三）免疫酶标电镜技术的实例
• Ⅲ．非标记免疫酶电镜技术
• （一）非标记免疫酶电镜技术的基本原理
• （二）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术的
• 程序
• （三）使用HRP抗体的非标记免疫酶电镜技术对
• RMV在植物组织细胞内定位的实例
• （四）使用PAP复合物的非标记免疫酶电镜技术
• 十一、免疫酶技术的进展
• Ⅰ．酶免疫电泳技术
• （一）酶免疫电泳技术的原理
• （二）酶（HRP）免疫电泳技术的程序
• Ⅱ．酶联免疫电扩散测定技术
• （一）酶联免疫电扩散测定技术的原理
• （二）酶联免疫电扩散测定技术的程序
• Ⅲ．酶标记抗原对流免疫电泳
• （一）酶标记抗原对流免疫电泳的原理
• （二）酶标记抗原对流免疫电泳程序（检测血吸虫
• 病）
• Ⅳ．酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术
• （一）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的原理
• （二）酶标醋酸纤维膜免疫电泳技术的程序（检测
• RMV）
• Ⅴ．用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原
• （一）用酶标试纸检测组织或器官内有关抗原的原
• 理
• （二）用酶标试纸检测青菜叶片内长叶车前花叶
• 病毒的程序
• Ⅵ．免疫酶技术的发展趋势
• 十二、免疫酶技术的应用
• Ⅰ．免疫酶技术的应用简况
• （一）内分泌学
• （二）免疫病理学
• （三）血液学
• （四）寄生虫学
• （五）微生物学
• （六）人体及动物病毒学（包括立克次氏体）
• （七）植物病毒学
• （八）兽医学
• （九）肿瘤学
• （十）细胞生物学
• （十一）遗传学
• （十二）生物化学
• （十三）医学及药物学
• （十四）食品卫生学
• （十五）其它
• Ⅱ．免疫酶技术应用实例的介绍
• （一）免疫酶标固相载体方法的应用实例
• （二）免疫酶标组织化学方法和免疫酶标电镜技术的
• 应用实例
• （三）非标记免疫酶组织化学方法和非标记免疫酶电
• 镜技术的应用实例
• Ⅲ．关于免疫酶技术应用的说明
• 十三、相关的实验技术
• （一）盐（硫酸铵）的饱和度与盐析技术
• （二）密度梯度离心技术
• （三）聚丙烯酰胺凝胶电泳技术
• （四）凝胶过滤技术
• （五）离子交换葡聚糖凝胶层析技术
• （六）离子交换纤维素层析技术
• （七）琼脂糖珠免疫吸附剂亲和层析技术
• （八）葡聚糖凝胶（Sephadex）免疫吸附剂亲和层
• 析技术
• （九）微量克氏定氮法与双缩脲法
• （十）酶与蛋白抗原的交联技术
• （十一）酶联金葡萄球菌A蛋白（简称PPA）技术
• （十二）样品去盐技术
• （十三）样品浓缩技术
• （十四）冰冻干燥技术
• （十五）样品贮藏方法
• （十六）玻璃器皿（包括盖玻片、载玻片）清洗技术
• （十七）醋酸纤维膜的制备法
• 附录
• Ⅰ．试剂（包括缓冲液）配方
• Ⅱ．缩写检索
• 参考文献