biu兽哥贴吧福利:河蚌多糖的生物学活性研究

河蚌多糖的生物学活性研究

林双喜  

【摘要】： 为深入研究淡水贝类活性多糖的生物学功能和使用价值，本研究选用淡水河蚌(Anodonta)作为提取多糖的试验原料，主要研究以下四个部分。 1河蚌多糖(Anodonta polysaccharides APS)提取工艺条件的优化 目的：本研究对河蚌多糖的提取条件进行优化。方法：选定提取温度、提取时间、料液比、提取次数作为主要影响因素，以总糖含量为指标筛选影响河蚌多糖的提取因素。在单因素试验基础上进行三因素三水平的正交试验优化提取河蚌多糖工艺条件。结果：影响总糖得率的因素先后顺序为：提取温度＞浸提时间＞料液比。最优工艺条件为：浸提时间2h、提取温度为90℃、料液比为1／90。 2河蚌多糖(APS)的分离纯化 目的：本研究对河蚌粗多糖对进行分离和纯化。方法：河蚌粗多糖经Sevag法去除游离蛋白，透析、冷冻干燥，过DE-52纤维柱和Sephadex G-200，用UV分光光光度计扫描，高效液相色谱(HPLC)及示差检测器检测纯度检测分离效果。结果：河蚌粗多糖可分离得APSⅠ和APSⅡ两种多糖，在260 nm和280 nm均无核酸和蛋白质吸收峰；APSⅠ为一个峰，APSⅡ为一大峰和一小峰。 方法：应用高速逆流色谱(HSCCC)对河蚌粗多糖的纯化，结果：以12.5％聚乙二醇(PEG)1000与16％磷酸钾缓冲溶液(pH 6.8)组成的水性二相系统，在高速逆流色谱仪上能成功地分离出多糖。 3河蚌多糖(APS)生物学功能研究 3．1河蚌多糖(APS)的体外抗氧化作用 目的：为研究河蚌多糖的体外抗氧化作用。方法：应用河蚌多糖体外对羟自由基(~·OH)和超氧阴离子(0_2~(·-))的清除、抑制H_2O_2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响、抗肝组织自发性脂质过氧化作用及总抗氧化能力等方法来研究河蚌粗多糖抗氧化活性。结果：河蚌多糖对氧损伤的抑制作用均表现量效关系。结论：河蚌粗多糖具有明显的体外抗氧化作用。 3．2河蚌多糖(APS)对罗非鱼免疫功能和抗氧化性能的影响 目的：为研究河蚌多糖对罗非鱼免疫功能及抗氧性能影响。方法：在罗非鱼基础饲料的基础上添加河蚌多糖0.5％、1.0％、1.5％和2.0％连续饲喂21 d，分别于第7、14、21 d采血检测鱼血清中的免疫指标(LYS、AKP、ACP)及肝脏MPO，抗氧化指标(MDA、SOD、GSH-PX)。结果：各添加组的免疫指标，抗氧化指标与对照组相比，差异显著(P＜0.05)，而各添加组间的差异不显著(P＞0.05)。结论：在罗非鱼饲料中添加0.5％～2％的河蚌粗多糖可明显增强罗非鱼的免疫性能和抗氧化能力。 3．3 APSⅠ对罗非鱼外周血淋巴细胞增殖的影响 目的：为研究纯化的河蚌多糖APSⅠ生物学功能。方法：在罗非鱼外周血淋巴细胞体外培养体系中，添加APSⅠ0.1 mg／mL、1 mg／mL和2 mg／mL，观察其对罗非鱼外周血淋巴细胞增殖的影响。结果：河蚌多糖APSⅠ添加组的淋巴细胞增殖的效果与对照组相比差异极显著(P＜0.01)，而添加各浓度间差异不显著(P＞0.05)。结论：纯化的河蚌多糖可极显著增加罗非鱼外周血淋巴细胞活性的作用。 4 APSⅠ的组成和结构的初步研究 目的：为研究APSⅠ的组成和结构。方法：通过薄层层析、元素分析仪、红外光谱仪、HPIC、~1H-NMR及。~(13)C-NMR对APSⅠ进行分析．结果：APSⅠ仅为葡萄糖组成的，不含N元素和硫酸根离子，C，H含量比值为6：1，糖苷键的连接方式主要是β糖苷键，同时存在不同连接方式的α糖苷键，可能存在α-Glc Cl→4)→和β-Glc Cl→4)→连接方式。结论：APSⅠ的是一个单纯的多糖化合物，连接方式比较复杂的多糖。

【关键词】：河蚌多糖 多糖提取 HSCCC 多糖生物学活性 多糖结构
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士

·                            3 结果40-42

·                            3.1 河蚌多糖体外抗羟自由基(~·OH)的清除作用40

·                            3.2 河蚌多糖对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血作用的影响40-41

·                            3.3 河蚌多糖体外抗肝组织自发性脂质过氧化的影响41

·                            3.4 河蚌多糖体外抗超氧离子(O_2~(·-))和总抗氧化作用41-42

·                            4 讨论42-43

·                            5 本章小结43-44