偶看新闻鸡胗鸭胗:基因工程中限制酶相关试题汇总及讨论
来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/04/26 07:15:07
人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
第（2）小题第3个空，一定要填“同种限制酶”吗？近几年来很多省的高考题中都不用一种限制酶，而改用“双酶切”了，而且双酶切还有很多优点，那这个题学生没填“同一种限制酶”给分吗？
zcm0324 ：
有幸参加了今年的阅卷，此处的评分细则：同种限制酶（限制性核酸内切酶，限制内切酶）（1分），必须强调同种，否则不得分； 注意此处是“同种”，没有说“同一种”当时许多老师也提出用多种酶来切割，如用两种酶切割，试题组长的意思是：即使是两种酶切割，那么切目的基因的酶和切质粒的酶也必须是同种，否则不能连接。选修总体来说比必修严，对错别字和专业术语要求很高！
以下高考题足于证明用不同酶切可以连接。
一、2005天津高考31题考查了目的基因和载体用不同酶(同尾酶)切后连接的例子。
【2005天津高考31】．（1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性未端。___________________________
②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后形成的黏性未端。_____________________
③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性未端能否连接起来？为什么？________________________________________________________
二、2008海南高考26题考查了双酶切的例子。
三、2008江苏高考32考查了用不同限制酶（产生平末端的限制酶）切后连接的例子。
（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
请根据以上图表回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 。
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。
（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。
（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为 。
（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
四、2009江苏高考34考查了目的基因和载体用不同酶(同功同裂酶)切后连接的例子。
34．(7分)苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图( 为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。
(1)将图中①的DNA用HindIII、BamH I完全酶切后，反应管中有▲种DNA片段。
(2)图中②表示HindIII与Bam I酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 ▲种重组质粒；如果换用Bst l与BamH l酶切，目的基因与质粒连接后可获得▲种重组质粒。
(3)目的基因插人质粒后，不能影响质粒的▲ 。
(4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导人植物细胞，并防止植物细胞中▲对T—DNA的降解。
(5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞▲ 。 