深棕色皮鞋配什么西服:感染性疾病的检查【1】

    感染（infection）是病原体（pathogen）和人体在一定条件下相互作用的病理过程，感染的病原体包括各种细菌、病毒、寄生虫、真菌、支原体、衣原体、螺旋体等。病原体的来源可分为外源性和内源性感染两种类型。外源性感染是由于外界的病原体侵入人体，如志贺菌、结核分枝杆菌、人免疫缺陷病毒（HIV）等引起的感染。内源性感染是人体内经常寄生的微生物，如大肠埃希菌、肠球菌、某些真菌等在一定条件下引起的感染。感染后是否引起感染性疾病（infection diseases）与病原体的数量、毒力和人体的抵抗力有关，并决定感染的发生、发展和结局。病原体感染后机体可以出现不感染、隐性感染（covert infection）、显性感染（overt infection）、持续性感染（persistent infection）或病原体携带状态（carrier state）几种类型。感染性疾病是由于感染的病原体毒力强、数量多，超过了机体的抵御能力，定植在机体一定部位增殖、扩散或蔓延、释放毒素，引起机体免疫病理反应，导致组织、器官等损伤，生理功能紊乱，并出现一系列的临床症状和体征。感染性疾病的检查主要包括病原体的检查、感染的血清学试验等，并由此确定感染性疾病的发生和性质；通过病原体的药物敏感试验、耐药株监测和医院感染的监测报告，为临床感染性疾病的最佳治疗药物选择，采取最有效的预防措施，防止感染的传播或流行提供及时、有效的实验数据。

    随着现代社会与临床医学的发展，目前感染性疾病的流行病学特点发生了明显变化，主要体现在以下几个方面：①由强毒性病原体引起感染的疾病，如鼠疫、白喉、伤寒、天花、小儿麻痹逐渐减少或绝迹，而条件致病的病原体引起的感染、医院感染逐渐增多。②由新的病原体、原有的病原体变异引起的新感染性疾病，如艾滋病（AIDS）、疯牛病、O157出血性肠炎、严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome, SARS）等陆续出现。③以前的感染性疾病，如淋病、梅毒、结核病等又重新流行。④多重耐药株，如耐万古霉素的肠球菌（VRE）、耐苯唑西林的葡萄球菌（MRS）、耐异烟肼的结核杆菌等，导致抗感染治疗无效或低效。因此，临床感染性疾病的检查应密切结合上述新的变化趋势进行。 

    细菌感染所致的感染性疾病占首位；病毒性感染在人群中的发生率最高，但不一定致病；真菌感染的发病率近年来显著上升；寄生虫，如隐孢子虫、卡氏肺孢子虫、滴虫等感染开始受到普遍关注。病原体的检查是临床确诊感染性疾病的主要手段，根据需要鉴定到一定水平即可。例如，作为临床病原学诊断，细菌感染只需鉴定到种，必要时才进一步鉴定；若进行流行病学调查，细菌鉴定应达到血清型或基因型。临床病原体检查必须通过采集标本，经过各种试验后才能明确诊断。标本采集质量的好坏直接影响诊断结果，早期采集、无菌采集、适当与适量采集是确保查明病原体的前提。临床病原体检查的方法有多种，包括涂片检查、分离培养、血清学鉴定和分子生物学诊断（molecular biological diagnosis）等，可根据临床需要和标本类型进行选择。临床标本分离培养的阳性结果最具确诊意义，但阴性结果并不能完全除外病原体感染的可能。病原体抗原成分检测可早期、快速诊断感染性疾病，阳性结果表明感染病原体的存在。分子生物学诊断为病原体感染的早期、快速、敏感、特异诊断成为可能，但应排除假阳性或假阴性结果。 

临床病原体检查的常用方法

㈠细菌感染的检查

    1、涂片检查

     临床标本或分离培养物涂片直接或染色后光学显微镜观察，可为进一步做生化反应、血清学鉴定等提供参考依据。通过显微镜观察有无病原体及其大致数量，病原体形态、染色特征等，可以迅速作出初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和脑脊液中的脑膜炎奈瑟菌等。

     ⑴不染色标本的检查     不染色标本一般用于观察细菌动力及运动情况，因为不染色标本直接在普通光学显微镜下，不能清楚看到细菌的形态与结构特征。细菌未染色时呈无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境不同进行观察。有鞭毛的细菌在镜下呈活泼有方向的运动，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。常用的方法有压滴法、悬滴法和毛细管法。例如，在高倍暗视野显微镜下悬滴米泔样粪便，观察到来回穿梭似流星样运动的细菌；另制备一标本加入O1群霍乱弧菌诊断血清，若来回穿梭似流星样运动的细菌停止运动，为制动试验阳性，可报告疑为O1群霍乱弧菌。

     ⑵染色标本的检查

     细菌标本经染色后，与周围环境在颜色上形成鲜明的对比，可在普通光学显微镜下清楚看到细菌的形态和某些结构。常用的细菌染色法有：①单染色法 只用一种染料将细菌和周围物体染成同一种颜色，称为单染色法。如吕氏美蓝或稀释石炭酸复红染色法。细菌经单染色法处理后，可观察其形态与排列、大小及简单的结构，但不能显示细菌染色特性。②复染色法 用两种或两种以上的不同染料进行染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成不同的颜色。本法既可观察细菌的形态结构，还可根据染色反应及着色深浅鉴别细菌的种类，故又称鉴别染色法。常用的有革兰染色法（Gram stain）和抗酸染色法(acid-fast stain)。 通过革兰染色，可将细菌分为革兰阳性（G+）和革兰阴性（G-）两大类，有助于缩小范围、初步鉴定细菌。例如，在脑脊液涂片中发现G-的肾形、凹面相对的双球菌，且在吞噬细胞内或外，则可报告“脑脊液直接涂片找到革兰阴性双球菌，形似脑膜炎奈瑟菌”；若发现有革兰阳性双球菌，呈矛尖状、宽端相对尖端向外，且菌体周围有荚膜，则可报告“脑脊液直接涂片找到革兰阳性双球菌，形似肺炎链球菌”。

     2、分离培养与鉴定     采集临床标本在选择性或非选择性培养基分离培养，观察细菌的菌落形态、生化反应、毒素产生等，并用已知特异性抗体的免疫血清鉴定临床标本中或分离培养物中未知的细菌，确定致病菌的属、种和血清型（血清学鉴定）等。

     ⑴分离培养：①增菌培养：由于标本中的细菌较少，用人工的方法提供生长繁殖所需的营养和最适条件，如温度、湿度和气体环境，使其迅速生长繁殖，使菌量增多，供进一步作纯培养或分离致病菌。大部分细菌在24~48h内培养生长良好。②分离培养：对于混有多种细菌的临床标本或其他培养物，经过划线接种到合适的选择性或非选择性固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原先混杂的细菌在固体培养基表面分离，一般经过18~24h培养后形成由一个细菌繁殖而来的细菌集团—菌落（colony），供细菌计数和纯培养用。挑选单个菌落，转种至另一培养基中，生长出来的细菌均为纯种，称为纯培养（pure culture）。分离纯培养是从临床标本中检查鉴定细菌非常重要的第一步，只有先从含有多种杂菌的标本中分离出目的菌纯培养，才能进一步对目的菌予以鉴定和研究。

     ⑵鉴定：根据纯培养细菌的染色形态、培养生长特性、生化反应和血清学试验结果，对分离培养的细菌作出鉴定。目前，大多数临床细菌实验室多借助自动化细菌鉴定与药敏试验系统，可简便、快速、准确地鉴定各种分离培养的细菌，并同时完成抗菌药物的敏感性试验。

     3、分子生物学诊断     PCR技术直接扩增病原体基因的保守序列，配合DNA探针杂交、DNA序列分析、基因芯片（gene chip）技术等，检测临床标本中或分离培养物中细菌的核酸，可以对感染的细菌作出明确的诊断、分类、基因分型和直接检测耐药基因等，菌落原位杂交也常用于快速筛选阳性克隆。特别是分子生物学检测技术操作的自动化分析仪，如自动化DNA提取仪，定量PCR仪，DNA序列分析仪，脉冲凝胶电泳仪等，使得病原体的分子生物学诊断有可能在临床常规应用

。     ⑴细菌的快速鉴定：几乎所有致病菌的基因都可直接从标本中进行扩增后检测而不受非致病菌的影响，尤其是对分离培养比较困难的细菌（如结核分枝杆菌）更具特殊意义。目前已用于结核分枝杆菌、沙门菌、志贺菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌等致病菌的快速鉴定。鉴定各种需氧菌和厌氧菌至种的水平，如鉴别金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌及家畜葡萄球菌，鉴别铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌及荧光假单胞菌，鉴别艰难梭菌、双酶梭菌及索氏梭菌。

     ⑵细菌的分类鉴定：通过对两菌株DNA杂交百分率判断其同源性，若＞70%为高度同源性，基因组差别很小；如果两菌株DNA杂交百分率＜25%为非同源性，两者不相关。 

     ⑶细菌毒素的检测：细菌的特异性毒素基因序列决定所产生毒素的种类，可用PCR扩增特异的毒素基因片段或直接用其特异性毒素基因探针检测致病菌的毒素基因，如霍乱肠毒素、金黄色葡萄球菌肠毒素、艰难梭菌毒素等。     ⑷细菌耐药性检测：通过扩增细菌的耐药基因或直接用耐药基因的探针检测标本中或纯培养细菌有无耐药基因，可以及早了解细菌对某些抗菌药物的耐药性或进行耐药性研究，如耐甲氧苯青霉素葡萄球菌的mecA基因、耐β-内酰胺抗生素的TEM型β-内酰胺酶基因。

     ⑸流行病学调查：通过分析流行菌株基因的同源性，可作为流行病学或医院感染流行菌株调查的依据。

     ㈡病毒感染检查

     1、病毒的形态观察：光学显微镜下只能观察到大型病毒（如痘病病毒）和病毒感染后人体细胞胞质或胞核内出现的包涵体，根据包涵体的特点，如巨细胞病毒感染后可在上皮细胞的核内周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样的嗜酸性包涵体；电子显微镜可直接观察到临床标本或培养物中有特征性的病毒颗粒，如轮状病毒、疱疹病毒、冠状病毒等。

     2、病毒培养：由于病毒（virus）是专性细胞寄生，需要在活细胞或动物体内才能分离培养，一般通过活组织培养、鸡胚接种和动物接种，最敏感而特异的方法为鸡胚接种。根据培养过程或动物接种后的变化特征、流行病学资料和标本来源可进行初步鉴定，有助于确定病毒的种类，但常需结合血清学试验鉴定。病毒的分离培养与鉴定比细菌更为复杂，一般实验室较少开展。

     3、病毒抗原检测：用免疫荧光或免疫酶等技术检测标本中的特异性病毒抗原，如血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等。

     4、分子生物学诊断     ⑴病毒感染的诊断及疗效观察：检测病毒核酸的序列或特异基因可确定存在病毒核酸，但是否为有感染性的病毒颗粒则有待进一步确认。应用PCR和分子杂交技术可以直接扩增和分析DNA病毒的特异性片段；RNA病毒则应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，先逆转录为cDNA再行PCR扩增后检测；定量PCR可对标本中的病毒进行量化分析，对病毒感染的诊断和治疗观察有重要意义。例如，患者血清中检测到乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）是诊断HBV感染最重要的依据。HBV感染后在检测到HBV表面抗原（HBsAg）的前2~4周即可查出HBV-DNA，故可诊断HBsAg阴性的HBV感染；通过定量PCR测定血清中HBV的载量（最低检出量可达20拷贝/ml），可以观察抗病毒疗效；急性乙型肝炎时，HBV-DNA先阳性，治愈后消失；慢性乙型肝炎时，HBV-DNA常持续存在，病毒载量或高或低。

     ⑵病毒的基因分型：不同病毒的DNA或RNA均有其特异的序列，同一种病毒的核苷酸组成具有一定的同源性，由此可以对病毒进行基因分型。例如：戊型肝炎病毒（HEV）为一种RNA病毒，在全世界发现的病毒株有7个主要基因型，各型之间的核苷酸同源性为74%~76%。 

    ⑶流行病学调查：检测感染病毒的基因型在不同国家或地区的分布特点，有助于分析流行毒株的变化特征。例如，不同地区的HEV基因变异较大，但同一地区的HEV基因序列则相对保守，这对HEV的诊断、研制疫苗、预防感染、临床治疗有重要价值。

     ㈢其他病原体感染的检查

     1、真菌感染的检查

     真菌（fungus）为真核细胞微生物，按形态可分为单细胞和多细胞两大类。单细胞真菌对人体有致病性的主要有新生隐球菌和白念珠菌。多细胞真菌有菌丝（hypha）和孢子(spore)，菌丝伸长分支并交织成团，又称霉菌。浅部真菌，如皮肤癣菌感染，直接涂片显微镜检查可见菌丝及孢子，可简便、快捷地作出初步诊断。真菌的培养要求低、在普通培养基（如沙氏培养基）上能生长，但真菌繁殖一代时间较长，分离培养至少需要4周。根据真菌培养的菌落形态、菌丝和孢子、染色特点、生化反应可以进行鉴定。真菌的抗原检测可检查血清和脑脊液中隐球菌、念珠菌及假膜组织胞浆菌感染。分子生物学诊断在真菌感染的检查中应用较少，PCR与基因探针技术联合用于卡氏肺孢子菌感染的诊断有一定意义。

     2、寄生虫感染的检查

     检查出寄生虫病原体是确诊寄生虫感染性疾病的最直接依据。根据不同种类的寄生虫感染人体后的不同发育阶段和寄生部位，采集相应的标本，如血液、粪便、阴道分泌物、骨髓等，涂片检查虫卵、虫体、包囊等是目前最可靠的确诊方法。例如，血涂片检查疟原虫，粪便涂片检查各种蠕虫卵、肠道原虫的滋养体和胞囊，阴道分泌物涂片检查阴道毛滴虫滋养体。部分较大的虫体，如蛔虫、绦虫节片等肉眼可以识别。分离培养极少用，在阿米巴或弓形体感染时有一定意义。

     3、螺旋体感染的检查

     螺旋体（spirochete）是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。临床标本涂片在暗视野显微镜下观察到螺旋体的特殊形态和运动状态。例如，怀疑为梅毒患者的生殖器分泌物涂片，若暗视野显微镜下观察到有胞体细长、运动活泼、由8～14个密螺旋组成的螺旋体时，有助于梅毒的诊断。除钩端螺旋体外，其他螺旋不易分离培养，使鉴定较为困难。分子生物学诊断螺旋体感染有一定意义，用PCR扩增可检出10条以上的钩端螺旋体。

     4、支原体感染的检查 

    支原体（mycoplasma）是一类缺乏细胞壁、高度多形性的最小原核细胞型微生物。革兰染色时支原体不易着色，直接涂片检查无临床诊断意义，一般以分离培养进行鉴定。肺炎支原体和解脲脲原体分离培养需10d以上才能长出菌落，有时需20d或更长，不适合临床快速诊断。PCR结合核酸杂交试验与序列分析，可以敏感、快速诊断各类支原体感染。

     5、衣原体感染的检查

     衣原体（chlamydia）是一类专性细胞内寄生的原核细胞型微生物，主要包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体。涂片检查可在被感染细胞的细胞质内查到包涵体，具有一定的诊断价值。免疫荧光染色检查被感染细胞内的衣原体抗原，可以快速诊断衣原体感染和分型。

     6、立克次体感染的检查 

    立克次体（rickettsia）是一类微小的杆状或球杆状的、除极少数外仅在宿主细胞内繁殖的微生物。免疫荧光染色可检查被感染组织标本中的立克次体抗原，PCR扩增产物分析可以敏感、早期诊断立克次体感染。    

常见感染性疾病的病原体检查

     感染性疾病是临床的常见病，重症感染有较高的病死率。正确的标本采集、分离培养与鉴定，及时、快速、准确地检出病原体，对感染的早期诊断和治疗等有重要的临床意义。

     ㈠血液与循环系统感染的检查 

    1、适应症 

    原发性血液及循环系统病原体感染较少，临床上多继发于其他疾病而致菌血症或脓毒血症、细菌性心内膜炎、心包炎、化脓性骨髓炎等。当遇患者有下列临床表现、疾病或做有关治疗时应考虑作血液或骨髓液的病原体检查。     ⑴血液与循环系统感染的症状：不明原因的发热、皮疹、肝脾肿大、关节痛、神志昏迷、休克等。

     ⑵血液与循环系统感染性疾病：细菌性心内膜炎、化脓性骨髓炎等。

     ⑶易导致血液与循环系统感染的疾病：急慢性白血病、再生障碍性贫血、粒细胞减少症或缺乏症、淋巴瘤、骨髓瘤等血液系统病，化脓性疾病、粘膜损伤性疾病、肝脏疾病继发感染、糖尿病继发感染、艾滋病、呼吸道感染及呼吸衰竭等。

     ⑷长期输液或导管介入治疗的疾病、血液透析、骨髓移植等。

     2、标本采集

     ⑴在病人使用抗菌药物之前, 发热初期或高峰时或发热前半小时采血。对已经使用抗菌药物治疗而又不能停药的患者，为了分离出病原菌应该重复采血数次。

     ⑵病人在24小时内，应从不同部位采血3次。急性细菌性心内膜炎病人, 每次采血间隔1~2h以上，亚急性细菌性心内膜炎病人, 每次间隔≥15min。

     ⑶采血部位为肘静脉。疑为细菌性心内膜炎时，可从肘动脉或股动脉采血。

     ⑷采血部位的局部皮肤应严格消毒，避免皮肤正常菌群污染。

     ⑸血液注入培养瓶之前，应注意消毒培养瓶盖。

     ⑹将血液注入培养瓶后应轻轻摇动，使其与液体培养基混合，避免出现血凝块。

     ⑺成人每次采血为8~10ml，婴幼儿为1~3ml。

     ⑻血液培养基的选择：①实验室自制的血培养基。②商品化培养基有需氧菌、厌氧菌、真菌和儿童血培养瓶，还有双相培养瓶（培养瓶内含有液体和固体两种培养基）等血培养系统。为提高培养阳性率最好同时作需氧菌和厌氧菌双瓶血培养。③怀疑L型细菌感染时，选用高渗血培养基。

     ⑼采血后应尽快送检，否则暂放室温。

     3、常见感染病原体的检查
     ⑴增菌培养：①自动化血培养系统：以Bactec 9000培养系统为例，每间隔10分钟自动检测1次血培养瓶，有细菌生长则自动报告阳性。血瓶培养5~7d时，若无细菌生长，则自动报告阴性。对特殊细菌或真菌可延长培养时间。自动化血培养系统具有快速检出和提高血培养阳性率等优点，检出时间的快慢取决于血瓶中细菌的种类和细菌的数量，最快阳性检出时间为1.5h，48小时阳性检出率为80%~90%。②目测法：每日用肉眼观察培养瓶有无细菌生长迹象，并定期转种培养基。若血培养基中有菌生长，则进一步作分离培养、鉴定或抗菌药物敏感试验。
     ⑵分离培养与鉴定
     ①需氧菌／兼性厌氧菌：需氧菌血培养瓶有细菌生长时，以无菌方法用注射器抽取培养液。培养液直接涂片、革兰染色镜检，根据菌体的染色和形态特点，可以初步报告结果。将培养液转种血平板和选择培养基上，空气中35℃培养。用常规方法或自动化细菌鉴定系统鉴定细菌，必要时用血清学试验鉴定细菌。
     ②厌氧菌：厌氧菌培养瓶有细菌生长时，转种培养液在厌氧菌培养基上，在无氧环境中35℃培养48～72h。同时也将培养液转种在血平板上，置空气中35℃培养。根据菌落生长特点、革兰染色、菌体形态、耐氧试验和生化反应鉴定厌氧菌。临床常见厌氧菌有类杆菌群细菌如脆弱类杆菌、艾格斯类杆菌等。
     ③真菌：培养瓶有真菌生长时，直接用培养液涂片镜检，高倍镜下见到圆形、椭圆形芽生孢子或假菌丝体，可初步报告有酵母样真菌生长。同时转种于沙氏培养基培养，白念珠菌生长比较快，在培养基上有乳白色或奶油色菌落生长，根据镜下形态，芽管形成试验和生化试验鉴定。常见菌为白念珠菌。
     4、其它感染病原体的检查
     ⑴疟原虫（Plasmodium）：用末稍血制薄血片或厚血片，进行瑞氏染色镜检，在红细胞内可找到环状体、滋养体或排列不规则的裂殖体。
     ⑵杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani）：肝、脾、骨髓穿刺液涂片、血涂片瑞氏染色镜检，可见到在巨噬细胞内或散在分布的圆形或卵圆形的无鞭毛虫体（又称LD小体）。
⑶微丝蚴（Microfilaria）：一般在夜间采血，可采用试管浓集法或制厚血片姬姆萨染色镜检。新鲜血涂片中可见到似蚯蚓样活动的微丝蚴，马来微丝蚴有尾核，斑氏微丝蚴无尾核。
⑷回归热螺旋体（Borrelia recurrentis）：制薄血片或厚血片，姬姆萨或瑞氏染色镜检，红细胞空隙间见到疏螺旋体，或用1滴新鲜外周血在暗视野显微镜下见到活动的螺旋体。
     5、临床意义
⑴菌血症与脓毒血症
健康人血液与骨髓液中无细菌、病毒、寄生虫等病原体，当少量细菌侵入血液后，若为一过性或持续存在、不繁殖或繁殖很少，不引起或仅引起轻微的炎症反应，称为菌血症（bacteremia）；此外，还可出现病毒血症（virumia）、真菌血症（fungemia）等。如果病原菌及其毒素侵入血流引起全身性炎症反应并出现临床症候群，如高热、寒战、呼吸急促、神志异常等，严重者引起休克、DIC和多脏器功能衰竭等，称为脓毒血症（sepsis）或败血症（septicemia）。血液与循环系统的感染严重危及病人的生命。重症感染病人、外科手术和免疫功能低下病人容易发生菌血症或脓毒血症。美国每年大约有30万~50万菌血症病人，病死率为20%~30%。我国不同地区和不同医院的发生率不同，原发性菌血症一般在15%左右。
菌血症或脓毒血症主要由需氧菌或兼性厌氧菌感染引起，如果是由产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、及耐万古霉素的肠球菌（VRE）、产金属酶的铜绿假单胞菌等难以治疗的细菌引起的感染，病死率较高。厌氧菌可以引起单独感染或与需氧菌同时感染。真菌血症常发生于二重感染。
⑵常见菌血症与脓毒血症
①常见的病原体（见表3-1-1）

表3-1-1常见菌血症与脓毒血症的病原体
种类 病原体
革兰阳性细菌 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、其他凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、结核分支杆菌
革兰阴性细菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、鮑曼不动杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌
厌氧菌 类杆菌群细菌如脆弱类杆菌、艾格斯类杆菌，产气荚膜梭菌
真菌 白念珠菌、新生隐球菌

②革兰阳性球菌血症
 MRSA及凝固酶阴性葡萄球菌：引起菌血症和脓毒血症较多，约占菌血症的10%~15%；常因原发病灶（如脓肿、痈等）继发感染或呼吸道感染所致。
肠球菌：常因泌尿系感染、消化道和腹腔感染等继发，约占菌血症的10%左右。这两类细菌感染的患者发病急重，可并发心内膜炎，而且易对多种抗菌药物产生耐药。
③革兰阴性杆菌血症：常见大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌等，多为免疫功能低下患者的继发感染所致。
④医院感染所致菌血症：主要见于重症监护病房的各类重症患者，恶性肿瘤放化疗、器官移植等免疫抑制剂药物使用者，各类插管、气管切开、血液透析等治疗患者，患者常为耐药菌严重感染、多重感染，而且易继发真菌感染，约占菌血症的30%~60%。
⑶寄生虫感染
①疟原虫为疟疾的病原体，我国多见间日疟和恶性疟，表现周期性的寒战发热、出汗退热缓解，日久可出现肝脾肿大。
②丝虫病急性期为淋巴管、淋巴结炎等，慢性期临床表现为象皮肿、乳糜尿、睾丸鞘膜积液等。
③螺旋体感染：回归热螺旋体引起急性传染病回归热。回归热螺旋体在血中大量出现时病人发高烧、头痛、肝脾肿大。数天退热后，血中螺旋体消失，可如此反复发作多次。
④杜氏利什曼原虫是黑热病的病原体，导致肝、脾、淋巴肿大，出现贫血、蛋白尿、血尿等。
㈡泌尿生殖系统感染的检查
1、适应症
⑴泌尿生殖系统感染的症状：发热、尿频、尿急、尿痛、排尿困难、血尿、脓尿、腰痛、尿道或阴道分泌物增多、阴道分泌物异常、会阴部疼痛、阴囊或阴道疼痛、下腹疼痛等。
⑵泌尿生殖系统感染性疾病：急性尿道炎、膀胱炎、输尿管炎、肾盂肾炎、肾结核、肾脓肿、肾结石或膀胱结石、前庭大腺脓肿、外阴或阴道念珠菌病、细菌性阴道病、急性子宫炎、急性盆腔炎、羊膜腔感染、前列腺炎、前列腺增生等。
2、标本采集
⑴尿液标本
在应用抗菌药物之前或停药1~2天后采集标本，最好采集清晨第一次尿液或者采集在膀胱内贮留6~8h的尿液。
① 中段尿液采集法：女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾水溶液冲洗外阴部及尿道口；男性需翻转包皮冲洗，用0.1% 新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布拭干，用无菌广口瓶收集中段尿5ml～10ml。
② 导尿采集法：采集导尿管的尿5~10ml于无菌容器中。该方法可以减少污染，但多次重复导尿可造成逆行感染。采集留置导尿管的尿液时应先消毒尿管接口周围，然后解开接口，弃去尿管部分的尿液，收集膀胱内尿液5ml～10ml。
③ 膀胱穿刺法：用于厌氧菌培养或留取尿标本困难的病人，可经耻骨联合上穿刺膀胱采集尿液。
④ 尿标本采集后应立即送检，否则，4℃冰箱暂时保存。若疑为淋病奈瑟菌感染，应立即接种，不能放冰箱保存。
⑵生殖道标本
①子宫内分泌物：用防污染的无菌采样器采集标本，避免阴道和宫颈口的正常菌群污染。
②女性盆腔脓肿：以无菌的方法用无菌注射器从子宫直肠凹陷处抽取脓液。
③前列腺液：急性前列腺炎忌作按摩，以防细菌扩散。慢性前列腺炎时可按摩前列腺收集标本或用前列腺活检组织做病原菌培养，标本采集前一定要注意清洁尿道口，避免正常菌群污染。
2、常见病原体的检查
⑴直接涂片检查
①细菌：用未离心的新鲜尿液，充分混匀后直接涂片，革兰染色后油镜检查，平均每个视野细菌计数≥1个为涂片阳性，相当于尿培养细菌计数≥105CFU/ml，敏感度可达90%以上，但此方法实际应用不多。
②真菌：直接用高倍镜检查尿液或阴道分泌物，见到圆形或椭圆形孢子、出芽孢子及假菌丝体为阳性。
③结核分枝杆菌(M. tuberculosis)：取高压灭菌后的晨尿离心沉淀物厚涂片，抗酸染色镜检。见到菌体呈红色、略带弯曲，有时呈分枝状的杆菌，可报告见到抗酸杆菌。此外，还可以用子宫内膜刮出物、宫颈组织，前列腺液等直接涂片检查结核分枝杆菌。
⑵分离培养与鉴定
①尿液定量细菌培养：为了确诊泌尿道感染（urinary tract infection, UTI），需做尿液定量细菌培养（结核分枝杆菌例外）。用1?l定量接种环或加样器取尿液接种在血平板和麦康凯平板上，空气中35℃培养24h~48h，若有细菌生长，计算1ml尿液中菌落数（colony formation units，CFU）并鉴定细菌。如果48h不生长细菌，则报告无细菌生长。
②生殖道标本和前列腺液细菌培养：将标本接种在血平板和麦康凯平板上，空气中35℃培养24~ 48h，有细菌生长，采用常规方法或自动化细菌鉴定系统等方法鉴定。怀疑宫腔脓肿有厌氧菌感染时应做厌氧菌分离培养和鉴定。
③结核分枝杆菌培养：尿液离心沉淀物经处理后，接种于改良罗氏培养基或结核菌自动化培养系统的培养基、MGIT培养管中分别培养。改良罗氏培养基上需培养6~8周，生长的菌落呈凸起、奶酪色、不透明、粗燥型，菌体抗酸染色阳性。自动化培养系统能快速检测结核菌生长。对培养出的抗酸杆菌可采用常规法或基因检测等方法鉴定。
4、临床意义
⑴细菌感染：尿液定量细菌计数是作为泌尿道感染诊断的依据，当清洁中段尿或导尿（非留置导尿）革兰阴性杆菌计数≥105CFU/ml、革兰阳性球菌≥104CFU/ml、耻骨联合上膀胱穿刺留取尿液培养细菌数≥103CFU/ml时，有对泌尿系感染有诊断意义。由于抗菌药物治疗或用快速利尿剂等因素影响，细菌计数可能在103~104CFU/ml之间。根据细菌计数并结合病人临床症状进行诊断和治疗用药。细菌感染引起的临床常见病包括急慢性尿道炎、膀胱炎、输尿管炎、肾盂肾炎、前列腺炎、睾丸炎等，重者可引起盆腔脓肿、肾脓肿。在感染的细菌中大肠埃希菌为最常见菌，其中产ESBLs菌株增加；肠球菌的感染仅次于大肠埃希菌，粪肠球菌和屎肠球菌的总感染率占肠球菌的90％以上。屎肠球菌较粪肠球菌耐药率高。高耐氨基糖甙类抗生素肠球菌有增加趋势，粪肠球菌对庆大霉素高水平耐药率为40.2%~56%左右，屎肠球菌为48.5%~67.50％左右。耐万古霉素肠球菌在我国的耐药率为2.2%～3.8％。结核分枝杆菌可引起肾结核及女性盆腔结核，男性附睾、精囊和前列腺结核等。
⑵真菌感染：由于临床对重症感染病人的治疗中大量、长时间使用广谱抗菌药物，导致真菌二重感染，真菌性尿道炎有所增多。此外，念珠菌被视为性病的病原体，常引起外阴、阴道念珠菌病，临床表现为外阴瘙痒、阴道内疼痛、阴道分泌物增多、呈豆腐渣样。常见感染的真菌为白念珠菌。
⑶泌尿生殖系统感染的常见病原体
此部分主要涉及细菌和真菌感染，其它病原体感染的检查见第四节：性传播疾病的实验诊断。
泌尿生殖系统感染的常见病原体
种类 常见病原体
革兰阴性细菌 大肠埃希菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、克雷伯菌、阴沟肠杆菌、沙雷菌、不动杆菌等
革兰阳性细菌 粪肠球菌、屎肠球菌、甲型溶血性链球菌、表皮葡萄球菌、结核分支杆菌等
厌氧菌 类杆菌属细菌
真菌 白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌

㈢呼吸系统感染的检查
1、适应症
⑴呼吸系统感染的症状：发热、咳嗽、痰多（如泡沫血痰、铁锈色痰、脓痰）、咯血、呼吸困难等。
⑵呼吸系统感染性疾病：鼻窦炎、咽炎、扁桃体炎、支气管炎、肺炎、肺脓肿、肺结核、猩红热、百日咳、白喉等。
2、标本采集
呼吸道标本应该在抗菌药物应用之前采集，采集过程中尽量避免口腔正常菌群的污染。标本采集后立即送检，避免少量污染细菌过度生长。若不能及时送检的标本暂放4℃冰箱，若分离培养肺炎链球菌、流感嗜血杆菌，不能放4℃冰箱。
⑴咽拭子采集法：用棉拭子采集病人咽后壁或悬雍垂的后侧，反复涂抹数次；采集白喉标本时要擦拭咽、鼻粘膜、伪膜部分和深层组织的分泌物，并立即送检。
⑵鼻咽拭子采集法：鼻咽拭子是一端弯曲的金属棉拭子（有商品），经鼻腔进入鼻咽部采集标本，置于运送培养基送检。
⑶鼻咽管采集法：用细鼻饲管从鼻腔进入到鼻咽部，用负压吸引器吸取鼻咽部分泌物并放入无菌容器内送检。用于病毒培养的标本，最好在床边接种，否则放冰壶内立即送检。
⑷痰液标本采集法
①咳痰：病人晨起用清水漱口数次，以便将口腔内正常菌群漱出。指导病人用力咳出呼吸道深部的痰液，置无菌容器中送检。痰量少者可采用加温45℃左右的10%氯化钠溶液雾化吸入，使痰液容易排出。
②吸痰管吸痰：对严重感染而又无力咳痰或昏迷病人可采用吸痰管吸痰。
③用防污染纤维支气管镜刷直接取得痰液或采集肺泡灌洗液，放置无菌容器中。
④气管穿刺法：怀疑厌氧菌引起的肺部感染，可通过气管穿刺取得痰液。
3、常见病原体的检查
⑴直接涂片检查
①痰液细胞检查：挑取脓性痰液加盖玻片，在低倍镜下计数白细胞和鳞状上皮细胞的数量，每个视野多形核白细胞≥25个，鳞状上皮细胞＜10个，表明是下呼吸道的感染标本，适合做细菌培养。军团菌和结核菌培养不受此影响。
②肺炎链球菌（Streptococcus pneumonia ）：痰液直接涂片、革兰染色镜检，见到革兰阳性双球菌，呈矛头状排列，有的带有荚膜，结合临床可初步诊断。
③结核分枝杆菌：高压灭菌后挑取痰液在洁净无划痕玻片上均匀涂片、厚度适宜，进行抗酸染色，油镜检查见到抗酸染色阳性及形态特点似结核菌时，报告“找到抗酸杆菌”。
④白喉棒状杆菌（Corynebacterium diphtheriae）：将分泌物涂片，采用Neisser或Albert法染色，镜下见到革兰阳性杆菌，排列不规则，呈V、Y及栅栏状排列，有明显异染颗粒，可报告见到革兰阳性棒状杆菌。
⑵分离培养与鉴定
①定量细菌培养：对痰标本或肺泡灌洗液进行定量细菌培养，计算每毫升中不同种类的细菌数（CFU/ml），并鉴定细菌。
②肺炎链球菌：肺炎链球菌在血平板上菌落为扁平、表面光滑、周围有草绿色溶血环，有的菌落中央塌陷，呈脐窝状。该菌胆汁溶菌试验阳性、发酵菊糖、Optochin敏感试验阳性，小白鼠毒力试验阳性等。
③流感嗜血杆菌（Heamophilus influenzae）：将标本接种在巧克力选择琼脂平板上，放置含5%~10%CO２环境培养。细菌与金黄色葡萄球菌一起培养时有“卫星现象”（satellite phenomenon）。菌体为多形性革兰阴性小杆菌。根据生长需要Ｘ、Ｖ因子、生化反应鉴定细菌。
④军团菌（Legionella）：标本接种在活性炭酵母浸膏培养基上（BCYE）培养，只能在BCYE培养基上生长的革兰阴性杆菌（不易着色），结合生化反应和血清学分型鉴定细菌。
⑤结核分枝杆菌：痰液或支气管肺泡灌洗液经处理杂菌后接种培养。（与尿结核菌培养方法相同）。
⑥肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia）：肺炎支原体对营养要求比较高，培养基中需加入小牛血清和新鲜酵母液等。将采集的咽拭子标本、支气管分泌物、鼻咽洗液、痰等标本接种于液体和固体选择培养基中培养１～２周，结合菌落生长特性和生化反应鉴定。因肺炎支原体培养时间长而且阳性率很低，临床常采用血清学或分子生物学方法检测。
⑦肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒等不同病毒需选择不同的敏感细胞株进行培养。
4、临床意义
⑴病毒感染：流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和冠状病毒等为呼吸道感染的常见病毒，免疫功能低下者如婴幼儿、老年人、癌症患者、器官移植病人等易发生感染。引起严重急性呼吸综合征（SARS）的新型冠状病毒在2003年的流行中，中青年感染者居多。不同种类病毒引起的临床表现和造成的严重程度不同，如较重者患有急性和慢性支气管炎、毛细支气管炎和急性肺炎。甲型流感病毒易发生变异，新变异株除散发流感外，还引起爆发流行。近年，巨细胞病毒（CMV）引起的肺炎有增加趋势。病毒性肺炎严重者发生死亡。
⑵细菌感染：下呼吸道细菌感染是导致病人死亡的一个主要原因。临床常见感染有急性和慢性气管炎、支气管炎、肺炎、肺脓肿、胸腔脓肿、肺结核病等。常见感染细菌有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、铜绿假单胞菌、产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌、沙雷菌、不动杆菌、流感嗜血杆菌等。肺脓肿常常伴有厌氧菌感染，偶见奴卡菌或放线菌感染。嗜肺军团菌肺炎及其小型爆发，国内有不少报道。近年，结核病有回升趋势，而且结核分枝杆菌多重耐药菌株也不断增加，全球每天约有8000人死于结核病，世界卫生组织已将结核病作为重点控制的传染病之一。此外，非结核分枝杆菌感染有增多趋势。白喉棒状杆菌引起传染病白喉（diphtheria），细菌在咽部粘膜上繁殖，形成白色伪膜，继而发生在喉部或气管内，容易造成窒息死亡。目前，该病几乎绝迹。
由于病人自然咳出的痰容易被口腔正常菌群污染，痰培养生长的细菌，有时难以评价是否有临床意义，通过对痰质量的评定和定量细菌培养，尚有一定的参考价值。当痰细菌计数≥106CFU/ml或经纤维支气管镜、人工气道吸引采集的下呼吸道分泌物细菌计数≥105CFU/ml、支气管肺泡灌洗液细菌计数≥104CFU/ml和防污染支气管肺泡灌洗液（PBAL）细菌计数≥103CFU/ml时，具有临床诊断意义。
⑶真菌感染：免疫功能低下者如白血病病人和其他长期应用抗菌素治疗的重症病人，容易引起真菌性肺炎。病原真菌常以白念珠菌为主，其他可见曲霉菌、毛霉菌、组织胞浆菌等。AIDS患者易发生卡氏肺孢子菌（pneumocystis carinii）感染。
⑷支原体感染：肺炎支原体是人类原发性非典型肺炎（primary atypical pneumoniae, PAP）的主要病原体之一，肺炎支原体主要经飞沫传播，可导致疾病的流行，儿童及青少年多见发病。
⑸衣原体感染：肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia)在人之间通过飞沫传播，引起支气管炎、肺炎等，儿童和青少年容易感染，感染率为10%左右。我国成人肺炎衣原体抗体阳性率高达50%左右。鹦鹉热衣原体肺炎是由于人接触鸟类而感染。新生儿沙眼衣原体肺炎多因其在分娩过程中感染所致。
㈣消化系统感染的检查
1、适应症
⑴消化系统感染的症状：急慢性腹泻、粘液便或脓血便，无痛性水样便或米泔水样便，长期抗生素治疗后排稀糊状便、排便次数多，婴幼儿腹泻伴高热惊厥等
⑵消化系统感染性疾病：细菌性痢疾、细菌性食物中毒、消化道溃疡、胃肠炎、感染性腹泻等。
2、标本采集
标本采集最好在使用抗菌素之前，采集后及时送检。
⑴胃粘膜组织采集：用胃镜采集胃窦、胃体等多部位的胃粘膜病变组织后立即放入20%葡萄糖溶液中送检。
⑵粪便标本采集：采集发病早期带有脓血和粘液部分的粪便，稀水样粪便应选择含有絮状物的部分，盛于无菌小瓶中及时送检。对难以自然留取粪便者，可选用直肠采便器，用甘油盐水或生理盐水先湿润插入端，然后插入肛门4~5cm处，轻轻旋转采便器采集标本，取出后放入无菌容器中，若不能及时送检，应将标本放在卡-布（Cary-Blair）运送培养基中送检。
⑶食物中毒标本采集：可疑食物、患者呕吐物、胃液等，盛于无菌小瓶中及时送检
3、常见病原体的检查
⑴直接涂片检查
① 粪便菌群观察：取粪便直接涂片、革兰染色。油镜下见到革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌或酵母菌等不同菌群的数量，可初步观察球菌与杆菌的比例（球杆菌比）并报告结果。
② 水样便直接镜检：用压滴法或悬滴法观察细菌的动力，在暗视野显微镜或光学显微镜下见到来回穿梭似流星样运动的细菌，并用霍乱弧菌抗血清做制动试验，若为阳性，报告可疑为霍乱弧菌。
③ 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori ,HP）检查：采集的胃粘膜组织经研磨后，直接涂片、革兰染色，在油镜下见到革兰阴性弯曲杆菌，呈S形或海鸥展翅样排列。
④ 粪便直接涂片法检查虫卵或滋养体：为提高阳性率可采用改良加藤法检查肠道蠕虫卵；用碘液直接涂片法检查原虫包囊；透明胶纸肛周拭擦法检查蛲虫卵。阿米巴痢疾的粪便呈酱红色，镜检观察大滋养体时，粪便必须新鲜才能见到活动的滋养体。粪便中的灵芝孢子与虫卵极为相似，应注意区别。
⑵脲酶试验（urease test）：将采集的胃粘膜组织块放入含有20%尿素培养液内，观察数分钟，培养液很快由黄色变为红色，提示幽门螺杆菌中的脲酶分解尿素为阳性，培养液不变色为阴性。
⑶分离培养与鉴定
① 幽门螺杆菌： 将研磨后的胃粘膜组织标本，接种在幽门螺杆菌选择培养基上，在微需氧环境中培养48~72h，根据细菌的典型特点及生化反应鉴定。
② 致泻性大肠埃希菌：将粪便或呕吐物接种在肠道菌选择培养上培养。细菌初步鉴定为大肠埃希菌后，分别与5种不同型的诊断血清做凝集试验以确定血清型，包括肠毒素型大肠埃希菌（enterotoxigenic E. coli, ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（enteropathogenic E. coli, EPEC）、肠侵袭型大肠埃希菌（enteroinvasive E. coli, EIEC）、肠出血型大肠埃希菌（enterohemorrhagic E. coli, EHEC）、肠凝聚型大肠埃希菌（enteroaggregative E. coli, EAggEC），EHEC中常见的血清型为O157:H7
③ 沙门菌（Salmonella）： 取粪便或肛拭标本、呕吐物等接种在SS等选择培养基上培养。挑选可疑菌落做生化试验，当生化反应符合沙门菌的特性时，用沙门菌的抗血清做鉴定和分型。
④ 志贺菌(Shigella)：挑取粪便中脓血、粘液部分接种在SS等选择培养基上培养，挑选可疑菌落做生化试验，当生化反应符合志贺菌的特性时，用志贺菌的抗血清做鉴定和分型。
⑤ 霍乱弧菌(vibrio cholera)：取水样粪便或呕吐物接种于选择培养基中增菌及直接培养。用生长的可疑菌落涂片镜检并与O1群多价血清及O139型血清作凝集试验，确定血清群。同时做生化试验鉴定。
⑥ 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)：粪便或肛拭子标本直接接种在选择培养基上，42℃微需氧培养。根据菌体特点及生化反应鉴定细菌。
4、临床意义
⑴肠道菌群失调症（intestinal dysbacteriosis）：健康成年人粪便中有较多的常驻细菌（又称正常菌群），主要包括大肠埃希菌、肠球菌、厌氧菌等，约占80%左右，另有少数产气杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌等多为过路菌，一般不超过10%。婴儿粪便中主要为双歧杆菌等。正常粪便中革兰染色阳性球菌和革兰阴性杆菌的比例（简称球杆菌比）约为1:10。常驻细菌的相对稳定对维持肠道的生理环境有重要的意义。一些慢性消耗性疾病、恶性肿瘤，尤其是应用长期使用各种抗生素和免疫抑制剂的病人，正常菌群减少或消失，葡萄球菌等明显增多球杆菌比值增大，常发生其他致病菌（如艰难梭菌等）或真菌感染（常见假丝酵母菌），可导致伪膜性肠炎等，临床称为肠道菌群失调症，近年来发病率呈逐渐上升趋势。对长期应用抗菌素治疗的病人应动态监测肠道菌群的变化，及时发现菌群失调症和调整治疗方案。
⑵细菌感染
①幽门螺杆菌（HP）感染：主要引起的慢性活动性胃炎、萎缩性胃炎、胃及十二指肠消化性溃疡等，某种基因型（cagA基因阳性菌株）可能与胃癌的发生有关。
②志贺菌感染：引起急性和慢性痢疾，我国以福氏志贺菌感染多见，病人有腹痛、发热、脓血便。儿童中毒性痢疾较多见，抢救不及时易造成病人死亡。多数痢疾为散发，也可以通过人与人之间传播，或偶因饮用污染水源或食物引起暴发流行。
③沙门菌感染：引起胃肠炎，病人临床表现为腹泻，伴有恶心和呕吐。鼠伤寒沙门菌常引起婴幼儿腹泻，也可因医源性感染造成小型暴发。
④ O1群和O139型霍乱弧菌感染：是引起烈性肠道传染病霍乱的病原菌。O1群霍乱弧菌引起全世界霍乱多次大流行，造成许多人死亡， O139型霍乱弧菌是近年新发现的血清型。
⑤致泻性大肠埃希菌中肠致病型大肠埃希菌（EPEC）常引起婴幼儿腹泻。肠出血型大肠埃希菌（EHEC）可发生暴发流行，有症状者出现腹泻和血便，无明显发热或低热，其中O157:H7血清型能并发溶血性尿毒症（HUS），发生溶血性贫血、血小板减少和急性肾功能衰竭，导致病人死亡。产肠毒素型大肠埃希菌（ETEC）引起旅游者腹泻。肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）引起的腹泻，有脓血、粘液便、病人有发热和腹痛等症状。肠聚集型大肠埃希菌（EAggEC）在儿童肠道感染中多见。
⑥空肠弯曲菌感染：主要引起成人和儿童急性肠炎，国外报道较多。
⑦产肠毒素脆弱类杆菌感染：近年来国外报道能引起成人和儿童腹泻。
⑵真菌感染：常见抗生素相关性真菌腹泻，以假丝酵母菌感染为主。
⑶寄生虫感染：肠道寄生虫感染不同地区人群差异较大。蛔虫(Ascaris)感染率为0.98%~43.4%，可引起肠蛔虫病，严重者导致儿童营养不良及发育障碍。钩虫(Hookworm)感染率为3.6%~5.90%，能引起消化不良、腹泻，重者出现贫血及肠出血。蛲虫（Pinworm）感染率为10.2%左右，病人主要表现为肛门及会阴部皮肤瘙痒，引起失眠、消化功能紊乱。溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)引起阿米巴痢疾，果酱样粘液血便；蓝氏贾第鞭毛虫感染率为11.34%左右，以脂泻为特征；结肠小袋纤毛虫、贝氏等孢子球虫、隐孢子虫等可引起腹泻。
㈤外科与创伤感染的检查
1、适应症
⑴软组织的急性化脓性炎症：疖、痈、蜂窝组织炎、丹毒等。
⑵化脓性疾病：甲沟炎、脓性指头炎、化脓性关节炎、气性坏疽、细菌性结膜炎、化脓性中耳炎、急性乳房炎、急慢性胆囊炎、急性梗阻性胆管炎、化脓性胸膜炎、结核性胸膜炎、原发性腹膜炎、结核性腹膜炎、腹腔脓肿、直肠或肛管周围脓肿、肾脓肿、肝脓肿、化脓性阑尾炎等。
⑶创伤感染：术后切口感染、导管感染、脐带残端感染等。
2、标本采集
采样前在病灶局部应禁用抗菌药物或消毒剂，有传染性的标本应在完全隔离的条件下采集。
⑴手术切口、各种窦道或创伤化脓性感染标本的采集：采集时先用无菌生理盐水擦洗感染灶，清除表面渗出物，深部脓液最好用无菌注射器抽取，标本量很少或特殊部位用无菌棉拭子采集，标本分别放无菌容器及运送培养基内送检。
⑵闭合性脓肿标本采集：严格消毒皮肤后，用无菌注射器抽取脓液。①将一部分脓液直接注入需氧菌和厌氧菌培养瓶中（或庖肉培养基）增菌培养。②将另一部分脓液充满无菌小瓶内送检，用于直接细菌涂片和直接细菌培养。也可以立即排尽注射器内空气，针尖插入无菌的橡胶塞内避氧并立即送检，做厌氧菌培养。
⑶放线菌感染标本的采集：脓液中的“硫磺样颗粒”放无菌容器内送检(避免接触空气)。
⑷胸水、腹水的采集：无菌采集1ml以上，置于含肝素的无菌试管内，常温下15min内送检。需做厌氧菌培养的标本直接注入厌氧菌培养瓶中（或庖肉培养基）增菌培养。
3、常见感染的病原体检查
⑴肉眼观察：观察标本的颜色、粘稠度和气味等，可初步推测感染的细菌。手术后切口或创伤的脓液为蓝绿色，可能是铜绿假单胞菌感染。从窦道内吸出的脓液有黄色的“硫磺颗粒”，为放线菌感染。脓液或分泌物有恶臭，疑为厌氧菌感染。局部组织产生大量气体，组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，是产气荚膜梭菌感染。干酪样的脓液可能为结核菌感染。
⑵涂片检查
①脓液标本：直接在洁净的玻片上涂片，革兰染色镜检，见到菌体为革兰阳性球菌呈葡萄状排列疑为葡萄球菌，呈链状排列可能为链球菌；革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，可能是产气荚膜梭菌；若为革兰阳性、抗酸染色阴性的不规则的分枝状菌丝体，放线菌可能性大；抗酸染色菌体部分呈阳性疑为奴卡菌感染；革兰阴性杆菌呈两端钝圆、多形性、着色不均匀、有空泡可能是脆弱类杆菌感染。
②胸水、腹水标本：3000转/分离心10min后取沉淀物涂片，经革兰染色或抗酸染色镜检。可能发现单一细菌或混合菌群，可直接报告。
⑶分离培养与鉴定
①一般细菌培养：标本接种在血琼脂平板、及肠道弱选择培养基及疱肉汤上培养。根据细菌染色、形态和生化特性及血清学等方法鉴定细菌。
②厌氧菌培养：标本直接接种或转种增菌生长的菌液于强化血平板和选择培养基上，在厌氧环境（厌氧箱或厌氧罐）中培养。根据菌落生长特点、耐氧试验、细菌染色、形态和生化特性等鉴定厌氧菌。
③奴卡菌培养：奴卡菌在血平板上生长较慢，48~72h菌落表面粗糙、颗粒状，深入培养基内生长，难于刮取，不同菌株产生不同的色素，巴西奴卡菌菌落表面有白色菌丝生长，根据菌落生长特点、菌体染色及形态和生化反应鉴定细菌。
④放线菌培养：用含有“硫磺颗粒”的脓液在厌氧环境中培养。
4、临床意义
⑴需氧菌感染：需氧菌或兼性厌氧菌引起伤口感染，浅表或深部外科切口感染以及腹腔、盆腔、胸腔、胆道、骨和关节等部位化脓性感染。常见感染的革兰阴性菌有大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、铜绿假单胞菌。革兰阳性球菌有表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等。铜绿假单胞菌常引起腿部外伤、烧伤和褥疮的感染，金黄色葡萄球菌常引起疖、痈、脓肿、化脓性关节炎等，2002年6月美国首例报道从一位患有糖尿病、慢性肾衰的透析病人插管部位分离出一株耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）。乙型溶血性链球菌引起丹毒、急性蜂窝组织炎、化脓性关节炎及创伤感染。表皮葡萄球菌为条件致病菌，可引起外科伤口感染。
⑵厌氧菌感染：厌氧菌常引起深部组织感染，有腹腔、胆道、胸腔、肺部、颅内、肛周、阴囊等各个部位感染；常见感染厌氧菌有产气荚膜梭菌、类杆菌群、普雷沃特菌、卟啉单胞菌和消化链球菌等。创伤深部多见产气荚膜梭菌感染。曾从一名糖尿病男性患者的阴囊脓肿物中曾分离出一株芽胞梭菌。
⑶放线菌感染：厌氧放线菌从口腔破损的粘膜侵入局部引起面部、颈部感染，使其局部形成脓肿、多发性窦道，排出的脓液中有肉眼可见的带有白色、黄色或棕色的硫磺颗粒。衣氏放线菌（A.israelii）为最常见感染菌。放线菌也可侵入肠粘膜引起腹部放线菌病。
⑷奴卡菌感染：为需氧放线菌，引起急性或慢性奴卡菌病，多为外源性感染。免疫功能低下者如老年人、糖尿病病人、AIDS和器官移植者为易感人群，有作者报道540例心肺移植受者中有10例感染奴卡菌，经治疗无一例死亡。奴卡菌，常见感染菌为巴西奴卡菌，也可因外伤侵入皮下组织，形成脓肿和多发性瘘管，好发于足部和腿部，重症感染者发生播散性转移感染，引起脑脓肿，出现高热，甚至昏迷，如果病因明确、采取积极治疗常够挽救病人生命。
㈥中枢神经系统感染的检查
1、适应症
出现剧烈头痛伴发热、恶心、呕吐、颈项强直、反射异常、昏迷等中枢神经系统感染的症状疑为脑炎和脑膜炎。
2、标本采集
在严格无菌操作下采集脑脊液2~3ml，但为了直接做需氧菌和厌氧菌的增菌培养，标本采集量应适当增加。疑为脑膜炎奈瑟菌感染时，标本注意保温并立即送检，绝对不能放置冰箱保存。
3、常见感染的病原体检查
⑴直接涂片检查
①革兰染色：脑脊液经3000rpm离心15min，取沉淀物涂片、革兰染色镜检，见到革兰阴性双球菌，菌体呈肾形成双排列，初步推测是脑膜炎奈瑟菌（图3-1-1）；其他细菌根据染色、形态特点等初步报告结果。
②抗酸染色：结核分枝杆菌或其他分枝杆菌抗酸染色呈阳性、奴卡菌为抗酸染色部分阳性。
③墨汁负染色：取脑脊液离心沉淀物于洁净玻片上，加入适量优质墨汁与之混合，覆盖玻片，用高倍镜观察，在黑背景下见到圆形或卵圆形菌体，直径为5~20μm大小，有的有芽生孢子，细胞外有一层较厚的荚膜，折光性强，细胞内有一个较大的反光脂质颗粒，或若干小颗粒，可以初步报告见到新生隐球菌（图3-1-2）。
④瑞氏或姬姆萨染色：2ml脑脊液，2000rpm离心5min，取沉淀物涂片直接显微镜检查，或者瑞氏或姬姆萨染色后显微镜检查，观察脑脊液中有无寄生虫或虫卵。
⑵分离培养与鉴定
①脑膜炎奈瑟菌和一般细菌：用离心沉淀脑脊液或增菌生长的培养液接种在巧克力琼脂或血平板上培养。若培养时间长、脑膜炎奈瑟菌有自溶现象。根据菌落特点、菌体形态、生化试验和血清学分型鉴定细菌。
②结核分枝杆菌：取脑脊液或其沉淀物接种于结核菌选择培养基中培养。（方法见尿液结核菌培养）。
③厌氧菌：取脑脊液或其沉淀物接种在强化血平板和选择培养基上厌氧培养。（方法见血液厌氧菌培养）。
④新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）：取脑脊液离心沉淀物接种于沙氏培养基或血琼脂平板上培养。在血平板上可见乳白色酵母样菌落。脲酶试验阳性。根据菌体形态和糖同化试验等鉴定或用免疫荧光法直接检测。
⑶乳胶凝集试验：能直接、快速检测脑脊液中致病菌可溶性抗原，目前有检测新生隐球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等商品试剂盒。
4、临床意义
⑴细菌感染：①球菌感染性脑膜炎：脑膜炎奈瑟菌是引起婴幼儿和青少年急性化脓性脑膜炎的常见细菌，该菌通过飞沫传播而导致流行性脑膜炎爆发流行。肺炎链球菌性脑膜炎多见于儿童和老年人，B群链球菌引起的新生儿脑膜炎多是由于新生儿经产道分娩时感染；A群链球菌性脑膜炎常与中耳炎和鼻窦炎感染相关；引起脑膜炎的球菌还有葡萄球菌、肠球菌、卡他布兰汉菌。厌氧消化链球菌可与需氧菌一起引起脑脓肿。②杆菌感染性脑膜炎：b型流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、克雷伯菌、假单胞菌、脑膜败血黄杆菌常引起免疫功能低下的新生儿、婴幼儿、老年人急性脑膜炎。类杆菌群、普雷沃特菌和卟啉单胞菌等厌氧菌引起脑脓肿。结核分枝杆菌、奴卡菌和产单核李斯特菌可引起慢性脑膜炎，结核性脑膜炎近年来有回升趋势。
⑵真菌感染：新生隐球菌、白念珠菌感染引起慢性或亚急性脑膜炎。免疫功能低下者如肾移植、淋巴瘤患者等容易感染，艾滋病患者中感染率高，若治疗不当有很高的病死率。
⑶病毒感染：①流行性乙型脑炎病毒（epidemic type B encephalitis virus）感染引起流行性乙型脑炎，人群对此病毒普遍易感，而且多数人感染后无症状而呈隐性感染，少数患者病情较重、死亡率较高，可留后遗症。②除脊髓灰质炎病毒外，还有其它一些病毒，如新肠道病毒68~71型、科萨奇病毒A或B也可引起脑膜炎或脑炎。
⑷寄生虫感染：中枢神经系统感染的寄生虫较多，如粪类圆线虫、旋毛虫、广州管圆线虫、棘颚口线虫、肺吸虫、血吸虫、曼氏迭宫绦虫的裂头蚴、猪带绦虫的囊尾蚴、细粒棘球绦虫的棘球蚴、多房棘球绦虫、溶组织内阿米巴、弓形虫、锥虫、疟原虫等，在脑脊液中可查到的寄生虫或虫卵包括溶组织内阿米巴大滋养体、弓形虫、肺吸虫卵、易位寄生的日本血吸虫卵、粪类圆线虫幼虫、棘球蚴的原头节和游离小钩、棘颚口线虫幼虫、广州管圆线虫幼虫等。由于脑脊液涂片显微镜能查到寄生虫的阳性率较低，故阴性时并不能除外某种寄生虫感染。

病原体感染的血清学诊断

病原体感染后，机体免疫系统活化，产生针对病原体特异抗原的抗体。第一次免疫应答从抗原免疫到抗体水平达到高峰的时间为6~10d，最初几天血清中的特异性抗体主要为IgM，后期以IgG为主。若机体第二次再次接触该抗原时，血清中将迅速出现特异性抗体，其达到高峰时间仅为4~5d，血清中的抗体以IgG为主，而且高峰浓度维持时间较长。特异性抗体的产生是诊断病原体感染的重要依据，血清学诊断（serological diagnosis）就是用已知病原体（如细菌、病毒）或特异性抗原（病原体特异的成分或产物），用凝集试验、沉淀反应、补体结合试验、免疫荧光试验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等免疫血清学试验检测患者血清中有无相应的特异性抗体及其滴度的动态变化，可以辅助诊断感染性疾病。但有一部分血清学试验所用的抗原为病原体的共同抗原，其阳性结果为非特异性。一些病原体感染的血清学诊断试验对围产期感染所致的流产、早产、先天畸形、智力发育障碍、死胎等检查具有普遍意义，常作为组合试验用于妇产科及优生优育的常规检查项目，例如，临床常用的TORCH感染的血清学诊断，TORCH指的是弓形虫（Toxoplasma gondii，TO）、风疹病毒（Rubella virus, R）、巨细胞病毒（Cytomegalovirus, C）、单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus, H）四种病原体的缩写，TORCH试验一般指这四种病原体抗体的检测。
一、细菌感染的血清学诊断
㈠C反应蛋白测定
C反应蛋白(C reactive protein，CRP) 是一种由肝脏合成的糖蛋白，由于能与肺炎链球菌菌体多糖“C”起反应，因而得名CRP，属于一种急性时相蛋白（acute phase preteins）。定量测定血清中CRP的含量，对辅助诊断细菌感染、鉴别细菌与病毒感染等有重要的临床意义。
1、适应症：
⑴诊断与监测感染，尤其是在微生物学检查较慢或不能检查时更有意义。
⑵鉴别细菌与病毒感染，如病毒性与细菌性脑膜炎、肺炎。
⑶鉴别手术后感染综合症。筛查急慢性器官损伤性疾病，如急性心急梗死、深静脉血栓、感染、恶性肿瘤、风湿病等。
⑷检测对抗生素治疗的反应。
2、标本采集：血清或血浆。
3、检测方法：ELISA、免疫渗透、速率散射比浊等方法。
4、参考范围：血清0.07~8.2 mg/L（速率散射比浊法）。
5、临床意义
⑴急慢性感染和组织损伤的筛查：①急性、慢性细菌感染性疾病，如各种急慢性化脓性炎症、菌血症和败血症等，血清CRP明显升高，。外伤后6h血清CRP浓度升高，48h达到峰值。②正常的CRP并不能完全排除轻微的、局部的炎症或某些慢性病，如系统性红斑狼疮、进行性系统硬化症。CRP升高的程度可反映炎症组织的范围或活动性。③CRP浓度与病情轻重相关，10~50mg/L时多为轻度炎症，如局部细菌感染（如膀胱炎、支气管炎、局部脓肿）、手术、外伤、心肌梗死、深静脉血栓、静止期风湿病、恶性肿瘤、病毒感染等； 50~100mg/L时，表明炎症反应较重；CRP＞100mg/L时，提示炎症反应严重，而且常为细菌感染。
⑵细菌与病毒感染的鉴别：①细菌感染时显著升高，病毒感染时不增高或仅有轻度增高。②一般情况下，革兰阴性菌感染升高最显著，常＞100mg/L，有时可达500mg/L；革兰阳性菌感染通常出现中等程度的CRP升高，多为100mg/L左右；病毒感染时，CRP增高不显著，一般不超过50mg/L。③细菌与病毒感染通过CRP升高的程度得以鉴别，例如脑膜炎和呼吸道感染时，若CRP＞100mg/L，强烈支持细菌感染。
⑶监测治疗和判断预后：①连续测定CRP可监测治疗效果，CRP升高的急性炎症可选用抗生素治疗，尤其是对缺乏微生物学诊断的高危患者较为重要；当CRP降至参考范围时，可停用抗生素治疗。根据CRP水平的变化，可选择用药的剂量。②CRP持续增高，表明炎症为消退，治疗失败，预后较差，例如恶性肿瘤、严重感染、心肌梗死等。
⑷机体的急性时相反应：急性组织或器官坏死（如急性心肌梗死、大手术后、、严重创伤），恶性肿瘤、风湿性疾病活动期等，CRP可增高。
6、评价与问题：
血清CRP增高并非细菌感染的特异性指标，应注意与急性时相反应鉴别。不同测定方法的参考范围有差别。CRP与其他急性时相反应检查如白细胞计数、红细胞沉降率的检测更简便，在急性时相反应时灵敏、快速。
㈡抗链球菌溶血素“O”测定
A组溶血性链球菌感染后，可产生链球菌溶血素O（streptolysin O，SO）等外毒素，SO具有溶解红细胞、破坏白细胞和血小板的作用，而且抗原性强，可刺激机体产生抗SO的抗体（anti-streptolysin O，ASO）。ASO在A组溶血性链球菌感染后1～3周至病后数月到1年内可在患者血清中检出ASO，其滴度的高低有助于A组溶血性链球菌感染有关疾病的诊断与鉴别。
1、适应症：①协助诊断A组溶血性链球菌感染。②辅助诊断风湿性疾病、急性肾小球肾炎。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：溶血法、乳胶凝集试验，速率散射比浊法等。
4、参考范围：＜1:400或＜500单位（溶血法、乳胶凝集法），＜200U/ml（速率散射比浊法）。
5、临床意义：①一般A组溶血性链球菌感染一周后ASO开始升高，3~5周达到高峰，第2个月开始下降，6~12个月恢复到感染前水平。②ASO滴度＞1:400为增高，表明患者有近期A组溶血性链球菌感染，见于A组溶血性链球菌感染性菌血症、败血症、心内膜炎、脑膜炎，急性咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染、皮肤软组织感染。③A组溶血性链球菌感染后的变态反应性疾病，如急性肾小球肾炎、风湿性疾病（如风湿性关节炎、心肌炎、心包炎）ASO滴度常显著增高，有助于诊断。④少数非溶血性链球菌感染，如结核病、结缔组织病、感染性心内膜炎等，ASO滴度可增高。
6、评价与问题：由于A组溶血性链球菌感染较为常见，健康人群中也存在一定滴度的ASO，但一般＜1:400，在判断结果时应注意。
㈢肥达试验
伤寒沙门菌（Salmonella typhi）感染人体后，潜伏期为7~20d，发病后约2周机体出现免疫反应，其菌体抗原（O抗原）和鞭毛抗原（H抗原）刺激机体产生特异性抗体，针对O抗原的抗体以IgM为主，而抗H抗原的抗体以IgG为主。A、B、C三型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi）感染后，其O和H抗原也能刺激机体产生抗体。肥达试验（Widal test）是测定患者血清中有无各种特异性抗体及其滴度，结合沙门菌的分离培养、鉴定，或者在前者失败的情况下，辅助诊断伤寒和副伤寒。
1、适应症：伤寒和副伤寒的辅助诊断
2、标本采集：血清。
3、检测方法：用已知伤寒沙门菌O抗原和H抗原，A、B、C三型副伤寒沙门菌H抗原与受检血清做试管或微孔板定量凝集试验，以“++”凝集的最高血清稀释度为滴度。
4、参考范围：伤寒沙门菌O抗体＜1:80、H抗体＜1:160，A、B、C三型副伤寒沙门菌H抗体＜1:80。
5、临床意义：①因预防接种或隐性感染，血清中可含有一定量的有关抗体，且其滴度随地区而有差异。当伤寒沙门菌O凝集滴度≥1:80，H凝集滴度≥1:160，或副伤寒的沙门菌H凝集滴度≥1:80时有诊断意义。单次滴度增加不能定论，应在病程中逐周复查。若滴度逐次递增或恢复期滴度比初次≥4倍者有诊断意义。②O与H抗体的诊断意义：O抗体出现较早为IgM，持续约半年，消退后不易受非特异病原刺激而重现。H抗体出现较晚为IgG，持续时间长达数年，消失后易受非特异病原刺激而能短暂重现。因此，若O、H凝集滴度均超过参考范围，则伤寒和副伤寒的可能性大；若两者均低，患病的可能性小；若O不高H高，可能预防接种或非特异性回忆反应；若O高H不高，则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。③少数病例在整个病程中，肥达试验结果为阴性，其原因可能是早期使用抗生素治疗、患者免疫功能低下或用免疫抑制剂治疗所致，发生率约为10%左右。
6、评价与问题：①现已可用ELISA测定伤寒和副伤寒沙门菌IgM抗体，在发病后一周开始升高，其灵敏度和特异性优于肥达试验，而且具有早期诊断价值。②IgM抗体滴度＞1:20对诊断伤寒携带者有一定意义。
㈣结核分枝杆菌抗体测定
人类对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的感染相当普遍，全世界大约1/3的人已感染过，但发生结核病者仍是少数，全球约有2000万活动性肺结核患者，每年新发病例约有1000万人，近年来发病呈上升趋势。结核分枝杆菌感染后，机体可产生抗体，但这些抗体在抗结核免疫中一般无保护作用。
1、适应症：辅助诊断结核病，尤其是肺外结核病。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：用结核菌素纯化蛋白衍生物（purified protein derivative, PPD）作为抗原包被到固相载体上，检测血清中对应的抗体。常用ELISA。
4、参考范围：阴性。
5、临床意义：肺结核病的实验诊断主要依靠痰涂片抗酸染色查到抗酸杆菌、分离培养与鉴定和分子生物学诊断。但由于痰涂片抗酸染色查抗酸杆菌的灵敏度低，分离培养与血清学鉴定的周期长、难度大，分子生物学诊断开展较少、假阳性率较高，使结核病的实验诊断较为困难。患者血清中的抗PPD抗体阳性，可作为结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一，80%~90%的肺结核患者可为阳性，特别是对肺外结核的诊断有参考意义。
6、评价与问题：由于健康人群感染结核分枝杆菌较为常见，血清种可出现的一定滴度的结核分枝杆菌抗体，但并不一定发病，其检查结果应密切结合临床和其他检查进行诊断。
㈤幽门螺杆菌抗体测定
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）感染非常普遍，感染人体后可引起消化性溃疡、慢性浅表性胃炎和萎缩性胃炎等。检测患者血清中抗HP菌体或脲酶的抗体是较为常用的无创性诊断HP感染的手段之一。
1、适应症：慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡的辅助诊断。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：间接免疫荧光法（IFA）、乳胶凝集试验、ELISA等。
4、参考范围：IgG、IgA型抗体的滴度＜1:100（IFA）。
5、临床意义：①HP感染后，血清中可出现IgG、IgA型抗体。IgG抗体滴度升高并可持续数年，若在两周内滴度增加超过4倍，为急性感染。 IgA型抗体一般仅在局部产生，不一定每例患者均能检测到。②IgG抗体滴度升高被认为是HP慢性感染的标志，阳性IgA型抗体与胃炎的活动性呈良好的相关性。约70%的活动性胃炎患者血清中可查到抗HP抗体，60%~90%的溃疡病患者的病情与抗HP抗体相关。③在胃炎或溃疡病治疗约6个月后，IgG抗体滴度明显下降提示治疗有效。
6、评价与问题：由于HP的IgG抗体维持时间较长，检测血清中IgG抗体不宜作为胃炎或溃疡病治疗后是否根除的诊断试验。
㈥嗜肺军团菌抗体测定
1976年在美国费城举行退伍军人集会期间，爆发了一种不明原因的、以发热、咳嗽为主的呼吸道流行性感染性疾病，后来分离的致病菌在1978年由WHO正式命名为军团菌（legionella）。军团菌可引起肺炎型和非肺炎型感染，肺炎型主要由嗜肺军团菌引起，潜伏期2~10d。军团菌的分离培养较为困难，检测其抗体有一定的临床意义。
1、适应症：协助诊断嗜肺军团菌感染。
2、标本采集：血清，在急性期（1周内）和和恢复期（3~6周）应分别采集。
3、检测方法：直接或间接免疫荧光法，ELISA。
4、参考范围：阴性（间接免疫荧光法）。
5、临床意义：嗜肺军团菌感染后，机体可产生特异性抗体。感染1周内IgM抗体产生，2周后IgG抗体出现，一个月内达到高峰。IgM抗体增高提示急性感染早期。IgG抗体可在体内持续数月，对流行病学调查有意义。一般情况下，应进行双分血清抗体滴度比较分析更有意义，恢复期比急性期抗体的滴度增加4倍以上，并且≥1:128有诊断意义；单份血清的滴度＞1:256（间接免疫荧光法）有诊断意义。
6、评价与问题：①嗜肺军团菌抗体检测方法较多，敏感度多为70%~90%，特异性多为95%以上，在判断结果时应注意所用方法及其参考范围。②军团菌抗原与假单胞菌、变形杆菌、支原体、螺旋体等有交叉，可导致假阳性反应，但抗体的滴度较低，可见于约20%健康人。
㈦布鲁菌抗体测定
布鲁菌（Brucella）为人兽共患感染性疾病的病原菌，可通过皮肤、呼吸道、消化道进入人体引起感染，过去多见于牧区，近年来散发于大中城市。布鲁菌病的潜伏期为5~21d，但也可高达数月。布鲁菌为细胞内寄生菌，感染后机体以细胞免疫为主，也可产生特异性IgM和IgG抗体，一般于感染2周后血液中开始出现。
1、适应症：布鲁菌病的辅助诊断，治疗后复发的监测。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：玻片凝集试验以灭活的布鲁菌菌液作为抗原与待测血清反应，观察凝集现象，以发生凝集血清的最高稀释度报告。ELISA比玻片凝集试验更敏感。
4、参考范围：＜1:80（玻片凝集试验）。
5、临床意义：血清学检查对布鲁菌病的诊断有意义，特别是对慢性期的患者，既有助于诊断，也能确定有无复发。当布鲁菌感染后，患者还未出现临床表现之前，血液中仅有低滴度的抗体；临床症状明显时，抗体滴度急剧升高，而且在患病后一年内还可维持较高滴度，以后可维持较低的滴度或转阴。若抗体滴度再次升高，则可能是复发或重复感染。若连续动态观察滴度逐渐升高，更具诊断价值。
6、评价与问题：①链球菌、伤寒、结核、流行性感冒、疟疾等急性感染时，玻片凝集试验可出现低滴度凝集，但＜1:80。。②约有10%的布鲁菌病患者的玻片凝集试验呈阴性。③在判断抗体的阳性滴度时，应注意考虑当地的布鲁菌的隐性感染情况。④不同试验方法参考范围有差异。
二、病毒感染的血清学诊断
㈠人类巨细胞病毒抗体测定
人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）属于DNA病毒，是人类病毒感染性疾病中最常见的病原体之一。大部分被HCMV感染的健康人无临床症状，先天性HCMV感染可致胎儿畸形、智力发育障碍等。HCMV感染是否引起疾病与机体的抵抗力有关，近年来器官移植、肿瘤的放射治疗、艾滋病等患者感染HCMV增多。普通人群的HCMV携带率较高，而且可通过输血感染。HCMV感染后，机体可产生IgM、IgG、IgA型抗体，检测血清HCMV对诊断急性或活动性人类HCMV感染、了解机体对原发感染的免疫反应、筛选供血者、器官供体等有一定意义。
1、适应症：①免疫功能受损患者，如器官移植与骨髓移植受者、接受免疫功能抑制剂治疗或放化疗的恶性肿瘤患者、艾滋病患者继发的感染。②先天性和产时或产后HCMV感染。③献血者HCMV感染筛查。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：ELISA。
4、参考范围：HCMV-IgM、HCMV-IgG、HCMV-IgA型抗体均为阴性。
5、临床意义：①普通人群中HCMV-IgG抗体阳性率可达40%~90%，HCMV-IgM抗体为阴性，表明HCMV的既往感染或潜伏感染率相当高。②器官移植与骨髓移植受者、接受免疫功能抑制剂治疗或放化疗的恶性肿瘤患者、艾滋病患者感染HCMV，如果HCMV-IgM抗体阳性，提示近期感染或病毒活动期；若双分血清HCMV-IgG抗体滴度出现4倍以上增长，表明近期活动性感染。由于艾滋病患者免疫功能低下，感染HCMV后HCMV-IgM抗体滴度常常较低，HCMV-IgG抗体滴度也没有进一步升高，但HCMV-IgA型抗体滴度明显升高。③孕妇原发性HCMV感染：母体在妊娠期间，特别是妊娠的最初3个月，HCMV可通过胎盘感染胎儿。孕妇原发性HCMV感染对胎儿的影响通过抗体检查一般有四种情况：a. HCMV-IgM阴性、HCMV-IgG阳性，大多数妇女为此结果，提示为既往感染，一般不需进一步检查或随访；b. HCMV-IgM阴性、HCMV-IgG阴性，为易感人群，妊娠期内每2个月复查一次；c. HCMV-IgM阳性、HCMV-IgG阴性，多为急性感染早期，但也有可能为假阳性，可在2周后复查，如果HCMV-IgG转为阳性则确定为急性期感染，否则可定为假阳性； d HCMV-IgM阳性、HCMV-IgG阳性，可能为妊娠期内原发感染或再次感染，应进一步检查脐血HCMV-IgM（20~25周）、脐血及羊水HCMV-DNA，如均为阳性可考虑终止妊娠。④产时或产后感染：在产时胎儿经过感染性的产道可被感染；产后婴儿吸食有感染性的母乳也可导致感染。出生后6个月以上的患儿，其体内原有的母体抗体基本消失，如果出现双分血清HCMV由阴性转为阳性，则提示原发HCMV感染；如果患病早期血清中有HCMV-IgG抗体，数周后的第二份血清抗体的滴度增长4倍以上，可诊断为近期感染，也可能是活动性感染，若双分血清抗体的滴度未发生变化，则可能是曾感染过HCMV。
6、评价与问题：①血清学诊断HCMV感染并非特异，最好以病毒学检查加以确诊，特别是结合HCMV-DNA检查对诊断更有意义。②HCMV在普通人群的感染率较高，必须结合患者的临床，才能作出准确的诊断并及时进行抗病毒治疗。③HCMV感染后常可致血液淋巴细胞、单核细胞增多、血小板减少，肝脏损伤引起血清氨基转移酶（ALT、AST）升高。遇患者有不明原因的上述异常时，可考虑作HCMV抗体检查。
㈡风疹病毒抗体测定
风疹病毒（rubella virus，RV）为单股RNA病毒，是风疹的病原体。风疹是一种以全身麻疹样出疹伴耳后及枕下淋巴结肿大为特征的急性呼吸道传染病，由于风疹病毒感染引起的症状较轻而一直不受重视，直到后来发现妊娠早期感染与胎儿先天缺陷有关才被重视。风疹病毒感染后机体可产生特异性RV-IgM和RV-IgG抗体，检测其滴度对诊断风疹、产前诊断、优生优育有重要意义。
1、适应症：风疹的辅助诊断，妊娠早期风疹病毒感染的筛查。
2、标本采集：血清、羊水。
3、检测方法：ELISA。
4、参考范围：RV-IgM和RV-IgG抗体均为阴性。
5、临床意义：①风疹病毒的易感人群为1~5岁的儿童和孕妇，如果RV-IgM和RV-IgG抗体均为阴性，表明无感染，可注射疫苗预防。②风疹的辅助诊断：一般应取双分血清，抗体滴度有4倍增高有意义。RV-IgM抗体出现为急性感染，患者在出现皮疹时即可测出，部分患者仅在皮疹后4~5d才能查到。先天性风疹综合征患儿一般在出生时血清中可查到IgM抗体和RV-IgG抗体（从母体获得）；在羊水中查到RV-IgM抗体也可诊断。③妊娠早期风疹病毒感染：孕妇血清中出现RV-IgM抗体（伴或不伴RV-IgG抗体）时，应考虑是否中止妊娠；如果仅有RV-IgG抗体，滴度低且无增高的变化趋势，提示为既往感染；但急性期和恢复期双份血清RV-IgG抗体滴度升高4倍以上，为近期风疹病毒感染。
6、评价与问题：风疹病毒抗体测定应结合风疹病毒RNA检查更为可靠。
㈢单纯疱疹病毒抗体测定
单纯疱疹病毒（herpes simplex virus, HSV）属于双链DNA病毒，根据限制性内切酶切点的不同可分为HSV-I和HSV-II两型。HSV在人群中感染较为普遍，并可导致多种疱疹性疾病。生殖器官以外的多为HSV-I感染（约占95%），生殖器官的感染多为HSV-II（约占78%）。HSV感染后，机体可产生IgM、IgG、IgA型抗体。
1、适应症：①单纯疱疹性疾病：口咽部疱疹、疱疹性角膜结膜炎、皮肤疱疹性湿疹、疱疹性脑炎、生殖器疱疹、新生儿疱疹。②免疫功能减低疾病，如器官移植受者、艾滋病、恶性肿瘤放化疗后继发的HSV感染。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：间接血凝试验、ELISA。
4、参考范围：HSV-IgM、HSV-IgG、HSV-IgA型抗体均为阴性。
5、临床意义：①单份血清HSV抗体阳性较难诊断HSV感染，但双份血清HSV抗体由阴性转为阳性（升高4倍以上）可诊断为原发感染。IgM抗体阳性提示近期感染，HSV-IgG抗体滴度升高多为既往感染。感染后患者的HSV-IgG抗体滴度波动较大，不易对诊断复发感染进行诊断。②早孕时若感染HSV可影响胎儿发育，故HSV抗体常作为优生优育的检查项目之一。
6、评价与问题：HSV感染较为普遍，也存在隐性感染。抗体检测结果应结合病毒抗原或核酸检查综合分析。
㈣EB病毒抗体测定
EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）属于一种嗜淋巴细胞的DNA病毒，主要感染B淋巴细胞。EBV感染4~6周后出现病毒血症，EBV在被感染的B淋巴细胞中复制，并主要被细胞毒T淋巴细胞清除。细胞毒T淋巴细胞出现增生反应，在外周血中表现为以异型淋巴细胞增多的“传染性单核细胞增多症”。EBV具有复杂的抗原成分，包括病毒衣壳抗原（viral capsid antigen, VCA）、早期抗原（early antigen, EA）、EBV核相关抗原（EBV nuclus- associated antigen, EBNA ）等，并可刺激机体产生相应的抗体。此外，EBV感染患者还可产生能与绵羊红细胞发生凝集的嗜异性抗体。检测EBV抗原特异的抗体和嗜异性抗体有助于诊断EBV感染相关的疾病。
1、适应症：①传染性单核细胞增多症的诊断。②Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌等恶性肿瘤的辅助诊断。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：间接免疫荧光法、ELISA，嗜异性凝集试验（heterophil agglutination test）。
4、参考范围：抗VCA、抗EA、抗EBNA阴性，嗜异性凝集试验阴性或滴度<1:28。
5、临床意义：EBV感染相关疾病具有不同的抗体变化特点，可通过血清学诊断和鉴别（见表3-2-1）。①传染性单核细胞增多症（Infectious mononucleosis，IM）：抗VCA IgM阳性（阳性率约为85%），可持续4~8周，是IM急性期诊断的重要指标；抗VCA IgG阳性且滴度较高，病愈后可持续数月或一年以上但抗体滴度保持低水平，可用于流行病学调查。约70%的患者可出现抗EA抗体，但滴度一般不高。嗜异性凝集试验一般于发病1周后出现阳性（滴度>1:56），2~3周抗体滴度达峰值，两次血清滴度上升4倍以上更有诊断意义。②EBV相关肿瘤：鼻咽癌患者血清抗VCA-IgA增高，抗VCA-IgM阴性，抗VCA-IgG滴度显著增高，符合率达90%以上；血清抗VCA-IgA在肿瘤治疗后病情好转时滴度下降，肿瘤复发时回升。③Burkitt淋巴瘤：血清抗EA-R、抗VCA-IgG滴度显著升高，抗VCA-IgM阴性。

EBV感染相关疾病的抗体变化特点
EBV感染
相关疾病 抗VCA 抗EA-D 抗EA-R
(IgG) 抗EBNA
(IgG) 嗜异性抗体(IgM)
 IgM IgG IgA IgG IgA   
传染性单核细胞增多症 ++ +++ + + - +/- - +++
EBV既往感染 - + - - - +/- + -
EBV复发感染 +/- +++ + + + + + -
儿童EBV
亚临床感染 ++ +++ + - - + - +/-
Burkitt淋巴瘤 - ++++ - +/- - +++ + -
鼻咽癌 - ++++ ++ + + +/- + -

6、评价与问题：①EBV在普通人群感染较为普遍，我国五岁以下儿童约有90%以上存在EBV抗体。②嗜异性凝集试验阳性除传染性单核细胞增多症时为阳性外，血清病、甲型肝炎、乙型肝炎、霍奇金病等也可呈阳性，必要时应作吸收试验进行鉴别。
㈤流行性乙型脑炎病毒抗体测定
流行性乙型脑炎病毒（epidemic type B encephalitis virus），简称乙脑病毒，属于单链RNA病毒，是流行性乙型脑炎（简称乙脑）的病原体。乙脑病毒感染后，机体可产生抗体，检测IgM抗体对乙脑早期诊断有一定意义。
1、适应症：流行性乙型脑炎的辅助诊断。
2、标本采集：血清、脑脊液。
3、检测方法：ELISA。
4、参考范围：乙脑病毒IgM抗体阴性。
5、临床意义：急性流行性乙型脑炎在发病后，患者血清中3~5d即可出现特异性IgM抗体，脑脊液中最早可在第二天检测到。特异性IgM抗体在2~3周达高峰，阳性率可达90%以上，对乙脑的早期诊断有意义。
6、评价与问题：①乙脑的抗体还可用血凝抑制试验、补体结合试验等方法检测补体结合抗体、血凝抗体等。血凝抗体产生早，单份血清滴度>1:320有诊断意义，双份血清抗体滴度增高4倍以上可确诊，急性期患者血清中该抗体阳性率达70%。补体结合抗体出现晚，不能用于早期诊断。②RT-PCR检测病毒核酸片段，适合于抗体尚未阳性病人的早期诊断，该法的特异性和敏感性均高。
㈥人类轮状病毒抗体测定
人类轮状病毒（human rotavirus, HRV）属于双链RNA病毒，是引起婴幼儿腹泻的主要病原体。HRV分为A~G 7个组，A组HRV感染主要引起婴幼儿腹泻，B组HRV感染引起成人腹泻。HRV感染后机体可产生特异性IgM和IgG抗体。
1、适应症：无粘液和脓血的非细菌性婴幼儿急性胃肠炎、成人急性腹泻。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：ELISA。
4、参考范围：HRV-IgM和HRV-IgG抗体均为阴性。
5、临床意义： 临床婴幼儿无粘液和脓血的非细菌性腹泻约有一半是由HRV引起，HRV-IgM抗体阳性提示现症感染。成人抗HRV-IgG抗体阳性，90%以上为既往感染，双份血清抗体滴度有4倍或以上增高，则有诊断意义。
6、评价与问题：HRV感染除检查抗体外，应结合HRV-RNA和抗原检查，诊断才更为可靠。
㈦肾综合征出血热病毒抗体测定
肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS）是由汉坦病毒（Hantaan virus）、多布拉伐-贝尔格莱德病毒（Dobrava-Belgard virus）、汉城病毒（Seoul virus）和普马拉（Puumala virus）病毒引起的传染病，在亚洲地区流行的病原体为汉坦病毒和汉城病毒。病毒感染人体后，潜伏期约2周，发病时出现以高热、出血和肾损害为主的综合征，1982年WHO统一命名为HFRS。HFRS病毒感染后，可产生IgM、IgG抗体，对早期诊断有一定意义。
1、适应症：以高热（39~40℃），头痛、眼眶痛、腰痛（“三痛症”），颜面、颈部、上胸部皮肤充血（“三红症”），皮肤及粘膜出血，蛋白尿、管型尿、血尿伴水肿为主要临床表现，疑为肾综合征出血热的辅助诊断。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：ELISA。
4、参考范围： HFRS-IgM、HFRS-IgG抗体阴性。
5、临床意义：HFRS感染发病后，血清中抗体出现较早，第2~3d，血清中可检出HFRS-IgM抗体，第7~10d达高峰；HFRS-IgG抗体在3~4d出现，第10~14d达高峰并可持续多年，并后或持久的免疫力。因此，单份血清HFRS-IgM抗体阳性、双份血清HFRS-IgG抗体滴度升高4倍或4倍以上，对HFRS有诊断意义。双份血清HFRS-IgG抗体滴度不升高多为既往感染，对回顾性诊断或流行病学调查有意义。
6、评价与问题：HFRS是一种死亡率极高（可达60%）的传染病，除检查抗体外，应及时作病毒的核酸检测，使诊断更为准确。此外，其他试验也可发现较多异常结果，如血小板减少，血涂片中异型淋巴细胞增多，尿中出现大量蛋白、红细胞和白细胞管型、尿沉渣中可见泌尿道脱落的巨大的融合细胞等，有助于HFRS的诊断。
三、寄生虫感染的血清学诊断
寄生虫病（parasitic disease）的确诊依赖于查到病原体，但是在感染早期、轻度感染、单性感染（仅有雌虫感染）、隐性感染、某些寄生虫感染后寄生的部位特殊而难于查出病原体，导致临床诊断困难时，血清学试验则可以辅助诊断寄生虫感染，而且对流行病学调查等也有特别的意义。
㈠囊虫抗体测定
囊虫病（cyticercosis）是链状带绦虫（Taenia solium），又称猪肉绦虫的幼虫（囊尾蚴，又称囊虫）寄生于人体皮下组织、肌肉和中枢神经系统等组织、器官所引起的严重的寄生虫病，常产生严重后果，脑组织损伤较重者可致死。根据感染组织活检可确诊囊虫病，血清学试验检测囊虫的特异性IgG抗体可作为临床筛查或辅助诊断囊虫病。
1、适应症：来自绦虫/囊虫病（囊尾蚴病）流行区，有排绦虫接片或食“米猪肉”史者，有疑似囊虫病的临床表现尚未确诊者。
2、标本采集：血清、脑脊液。
3、检测方法：ELISA、间接血凝试验（indirect haemagglutination test, IHA）。
4、参考范围： IgG抗体：ELISA 血清<1:64，脑脊液<1:8；IHA血清<1:128，脑脊液<1:8。
5、临床意义：囊虫病患者血清和脑脊液特异性IgG抗体滴度高于参考范围。ELISA的阳性率可达90％，但与棘球蚴感染患者血清有交叉反应。IHA的阳性率可达82％，而且特异性较高。当患者有相应的临床表现、基本排除了其他与之鉴别的疾病（尤其是棘球蚴病），而且血清和脑脊液特中特异性IgG抗体均为阳性，或用ELISA、IHA两种试验检查特异性IgG抗体均为阳性，结合头颅CT（或MRI）显像和病史，可诊断囊虫病。
6、评价与问题：①不同实验室所用血清学检测方法有所不同，参考范围有差异。②囊虫病在我国的东北、华北、河南、内蒙古较为多见。
㈡弓形虫抗体测定
弓形虫病（toxoplasmosis）是由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）感染所致的一种人兽共患疾病。母体妊娠时感染可传递给胎儿，引起胎儿先天性弓形虫病。成人感染一般多为无症状带虫状态，当机体免疫功能受损时，隐性感染可活化，导致重症弓形虫病，常见于恶性淋巴瘤、白血病、艾滋病、肿瘤的放化疗。刚地弓形虫感染后，机体可产生特异性抗体。血清学试验检测弓形虫的特异性抗体有一定的临床诊断价值。
1、适应症：①孕前或孕期优生优育常规检查，先天性弓形虫病诊断。②免疫功能受损有关疾病，如恶性淋巴瘤、白血病、艾滋病、肿瘤的放化疗等疑为弓形虫继发感染。
2、标本采集：血清。
3、检测方法： 间接免疫荧光试验（IFA），ELISA。
4、参考范围：IgM、IgG抗体均为阴性。
5、临床意义：①弓形虫感染较为普遍，我国普通人群中弓形虫抗体的阳性率为0.3%~11.8%，平均达5.3%；有些国外人群的阳性率较高，可达25%~50%，在分析血清学诊断结果时应特别注意。一般而言，血清特异性IgM抗体阳性提示急性感染，对早期诊断弓形虫病有意义。检测特异性IgG抗体的动态变化对慢性感染或既往感染诊断也有一定价值。②优生优育检查：孕前检查孕妇IgG抗体阳性，提示已获保护性免疫；若孕前检查孕妇血清抗体为阴性、而孕期呈阳性，则胎儿有感染弓形虫的危险，孕妇应自怀孕之日起每6周复查一次，如果抗体滴度逐渐升高，胎儿感染的危险性增大。
6、评价与问题：①IFA所测抗体多为虫体表膜抗原诱导的特异性抗体，因此具有早期诊断价值，但血清中有类风湿因子或抗核抗体时可出现假阳性反应。②ELISA敏感性高于IFA，且特异性强，简便快速，操作易自动化控制。采用IgM抗体捕获试验 (antibody-capture assay)，以抗人lgM抗体检测患者血清中IgM抗体，用于先天性以及急、慢性弓形虫病人IgM检测具有较满意效果，可消除类风湿因子的干扰。
㈢日本血吸虫抗体测定
日本血吸虫（Schistosome japonicum）属于在我国流行的血吸虫病的病原体，寄生于人类及多种哺乳动物的静脉血管内，患者常因严重感染而丧失劳动力或迁延不愈而危及生命。机体感染血吸虫后可产生特异性IgM、IgG、IgE型抗体，对临床诊断和流行病学调查有一定意义。
1、适应症：血吸虫病流行区、有肝脾肿大、腹水，疑为血吸虫感染的辅助诊断。
2、标本采集：血清
3、检测方法：①环卵沉淀试验 (circumoval  preciptin test，COPT) 为血吸虫病诊断最常用的试验之一。利用血吸虫卵内毛蚴分泌的抗原物质透出卵壳，与患者血清特异性抗体结合后，在虫卵周围形成镜下可见的沉淀物，即为阳性反应。通常检查100个虫卵，阳性反应虫卵数（环沉率）≥5％时即为阳性。②ELISA：用纯化的血吸虫或虫卵抗原成分检测患者血清中相应的抗体。
4、参考范围：COPT阴性，ELISA：IgM、IgG抗体均为阴性、IgE抗体为0~150IU/L。
5、临床意义：①日本血吸虫病患者COPT阳性率为94.1%～98.6％，有早期诊断价值。健康人假阳性率约为3％左右。日本血吸虫病患者治疗有效后COPT转阴较慢，治疗后1年转阴率仅达27%左右，治疗后2年转阴率为40%以上，治疗后4年转阴率为80%以上。若血吸虫病患者距末次治疗时间已3～5年，而COPT环沉率≥3％，可结合临床表现考虑给给予再治疗。②ELISA特异性和灵敏度较高（95％~100％），假阳性率为2.6％，可区分抗体的类型。血吸虫早期感染时，IgM、IgE抗体阳性，有诊断意义。IgG抗体阳性提示处于感染的恢复期或既往感染，可持续数年。
6、评价与问题：血吸虫感染的血清学诊断方法较多，包括环卵沉淀试验、尾蚴膜反应、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、免疫酶染色试验、酶联免疫印渍技术等，各有一定的有缺点，以ELISA的应用较为广泛和实用。
四、其他病原体感染的血清学诊断
㈠立克次体抗体测定
立克次体（rickettsia）是一类微小的杆状或球状体、革兰染色阴性、专性寄生（除极少数外）在宿主细胞内繁殖的微生物。立克次体感染可引起多种疾病，普氏立克次体（R. prowazekii）感染引起流行性斑疹伤寒，莫氏立克次体（R. mooseri）感染导致地方性斑疹伤寒，东方立克次体（R. orientalis）感染引起恙虫病。由于立克次体的分离培养与鉴定较为困难，因此，检测血清中立克次体的特异性抗体或交叉反应抗体（外斐试验），进行血清学诊断具有重要的临床意义。
1、适应症：流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、恙虫病的辅助诊断。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：①外斐反应（Weil-Felix reaction）：变形杆菌中的某些特殊菌株如X19、X2、Xk的菌体抗原（O抗原）与某些立克次体有共同抗原，能出现交叉反应。用这些变形杆菌代替立克次体与患者血清作凝集反应，可作为立克次体感染的辅助诊断。②免疫荧光试验（IFA）、ELISA、补体结合试验（CFA）
4、参考范围：外斐反应阴性，IFA、ELISA、CFA阴性。
5、临床意义
⑴外斐反应：凝集反应滴度＞1:25以上，病程中持续增高为阳性。各种立克次体感染性疾病的外斐反应的鉴别诊断见表3-2-2。外斐试验阳性率的高低与取材时间有很大关系，通常抗体在发病第一周内多为阴性或低滴度，人体感染立克次体发病后一周后可产生与变形杆菌菌体抗原（OX）交叉反应的抗体，3~4周达高峰，以后很快下降。抗体滴度≥1:160时有意义，≥1:320或恢复期与急性期的双份血清试验凝集的滴度增加4倍以上有诊断意义。流行性斑疹伤寒的OX19凝集反应阳性率可达100%。

表3-2-2 各种立克次体感染性疾病的外斐反应的鉴别诊断
立克次体感染性疾病 变形杆菌菌体抗原与血清的凝集反应
 OX19 OX2 OXk
流行性斑疹伤寒 ＋＋＋＋ ＋ －
地方性斑疹伤寒 ＋＋＋＋ ＋ －
恙虫病 － － ＋＋＋＋
Q热 － － －

⑵ELISA：可检测血清中的特异性抗体，尤其是IgM抗体的检出对早期诊断有意义。IFA是诊断立克次体感染较常用的方法，病程早期和晚期的双份血清抗体滴度增加4~8倍可明确诊断。CFA多用于Q热诊断，具有较高特异性。
6、评价与问题：变形杆菌性泌尿系感染、伤寒、钩端螺旋体病、回归热、疟疾、布氏杆菌病、严重肝病等可出现外斐反应假阳性，因此对外斐反应结果应结合临床综合分析。
㈡钩端螺旋体抗体测定
钩端螺旋体（leptospira）为细长、一端或两端弯曲成钩状的螺旋体，感染人体后引起钩端螺旋体病。患者轻似感冒，重者可因钩端螺旋体产生的毒素出现中毒症状、黄疸、肺出血、DIC、休克，甚至死亡。钩端螺旋体感染后，机体可产生特异性抗体，血清学诊断有一定意义。
1、适应症：钩端螺旋体病的辅助诊断。
2、标本采集：①血清，应采取病程早期和晚期双份血清，一般在疾病初期和发病第3~4周各采血一次。②脑脊液，有脑膜刺激症状者可采取脑脊液检测特异抗体。
3、检测方法：①显微镜凝集试验（microscopic agglutination test，MAT）：用钩端螺旋体与待测血清反应，暗视野显微镜下观察，阳性反应出现钩端螺旋体凝集或溶解现象。②乳胶凝集试验（LAT）：吸附钩端螺旋体特异性抗原乳胶颗粒与待测血清反应，出现凝集为阳性。③ELISA或IgM-斑点ELISA。
4、参考范围：血清和脑脊液MAT、LAT、ELISA均为阴性。
5、临床意义：钩端螺旋体感染人体一周后开始产生抗体，5~8周达到高峰。①MAT凝集滴度≥1:300或恢复期血清比早期血清滴度≥4倍时有诊断意义。②LAT凝集滴度＞1:2为阳性。③ELISA可检出特异性抗体，尤其是IgM抗体对早期诊断更有意义。
6、评价与问题：①MAT有较高的特异性，但要用活的钩端螺旋体培养物，操作较为繁琐。②ELISA尤其是IgM-斑点ELISA，简便、快速，而且有较高特异性和敏感度，尤其是可检测抗体的类型，更有利于早期诊断及流行病学调查。
㈢肺炎支原体抗体测定
肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia）是引起呼吸道感染的一种病原体，患者可发生咽炎、支气管炎、肺炎和肺外并发症。支原体肺炎约占非细菌性肺炎的1/3以上，近年来发病率有所增加。肺炎支原体感染发病后，机体可产生特异性和非特异性的抗体，用免疫学方法检测对协助临床诊断有一定意义。
1、适应症：呼吸道感染，尤其是肺炎的诊断与鉴别诊断。
2、标本采集：血清。
3、检测方法：①ELISA。②补体结合试验（CFT）。③冷凝集试验（cold agglutination test, CAT）：肺炎支原体感染后，机体可产生一种非特异的寒冷红细胞凝集素，能在0~4℃凝集自身或“O”型人红细胞。试验时取患者稀释血清与“O”型人红细胞在0~4℃做凝集反应，以最高血清稀释度发生凝集的稀释度报告滴度。Garrow建立的一种简便、快速方法较为实用：0.2ml全血与0.2ml 3.8%枸橼酸钠混匀，0~4℃冰箱中15~30s取出，倾斜试管观察有无凝集反应，呈粗大絮状凝集为阳性。
4、参考范围：ELISA、CFT、CAT均为阴性。
5、临床意义：①ELISA检出特异性肺炎支原体的IgM、IgG抗体有意义，IgM抗体对早期诊断更有价值。②CFT：主要检测的是IgM抗体，初次感染时可呈阳性，单份血清的抗体滴度≥1:64~128或双份血清抗体滴度增加4倍以上有诊断意义。③CAT：肺炎支原体肺炎患者在发病后约2周出现非特异的寒冷红细胞凝集素、4周达峰值、6周后开始下降或消失。血清中抗体的滴度≥1:64或或双份血清抗体滴度增加4倍以上有诊断意义。约33%~76%的肺炎支原体肺炎患者CAT阳性。
6、评价与问题：CAT的特异性不高，传染性单核细胞增多症、流行性感冒、肝硬化、冷凝集素综合征患等部分疾病可出现假阳性反应，应注意结合临床或其他检查鉴别。