偶看新闻星光大道沈阳女选手:信号肽和原核表达问题——重点
来源：百度文库 编辑：偶看新闻 时间：2024/05/04 05:10:29
实验背景：我要做某细菌分泌蛋白的表达，该基因的全序列有，经分析有信号肽，我要通过实验证实该序列有无表达成蛋白，可能后续要做个蛋白质电泳吧
遇到的问题：不知道如何选择表达载体才能更有效的进行表达。我看文献有的是用巴斯德毕赤酵母菌进行表达，但这是真核表达，老师让我做的是原核表达，不知道会不会有问题。求助各位了，谢谢麦唛222 (站内联系TA)大肠杆菌分泌表达效果不好的，只能分泌到周质空间，成功分到到胞外屈指可数。枯草芽孢杆菌分泌表达的倒是多，但是载体较少。现在分泌表达的用酵母的多。不管是哪一种表达系统，你要让它分泌表达的话都要选择带有信号肽的表达载体，并且克隆进去的序列要把你的蛋白原有的信号肽编码序列去除掉，只保留成熟肽编码序列，因为你的蛋白的信号肽宿主细胞一般不能识别的。
jasco (站内联系TA)如果要做原核表达，简单来说，去掉信号肽，将后面的序列构建到pet22b的信号肽后面，注意读框，然后做诱导表达吧。
麦唛222 (站内联系TA)有没有活性影响的因素比较多的，比如表达条件、蛋白本身的修饰等等了。你老师的建议也没错，能大肠杆菌里面解决的没必要去酵母里面做，毕竟大肠杆菌做起来简单，成本也低。你工程菌构建好后优化下表达条件，比如诱导剂浓度、诱导温度等。
下面的问题为什么要去掉信号肽基因的问题前面我已经回答了。
遇到的问题：不知道如何选择表达载体才能更有效的进行表达。我看文献有的是用巴斯德毕赤酵母菌进行表达，但这是真核表达，老师让我做的是原核表达，不知道会不会有问题。求助各位了，谢谢麦唛222 (站内联系TA)大肠杆菌分泌表达效果不好的，只能分泌到周质空间，成功分到到胞外屈指可数。枯草芽孢杆菌分泌表达的倒是多，但是载体较少。现在分泌表达的用酵母的多。不管是哪一种表达系统，你要让它分泌表达的话都要选择带有信号肽的表达载体，并且克隆进去的序列要把你的蛋白原有的信号肽编码序列去除掉，只保留成熟肽编码序列，因为你的蛋白的信号肽宿主细胞一般不能识别的。
jasco (站内联系TA)如果要做原核表达，简单来说，去掉信号肽，将后面的序列构建到pet22b的信号肽后面，注意读框，然后做诱导表达吧。
麦唛222 (站内联系TA)有没有活性影响的因素比较多的，比如表达条件、蛋白本身的修饰等等了。你老师的建议也没错，能大肠杆菌里面解决的没必要去酵母里面做，毕竟大肠杆菌做起来简单，成本也低。你工程菌构建好后优化下表达条件，比如诱导剂浓度、诱导温度等。
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