韶山型电力机车退役:血块中提取DNA的方法

来源：百度文库编辑：偶看新闻时间：2024/05/04 19:55:05

1.取15ml研磨器，加入5ml血块，4-5ml溶血试剂，研磨至无凝块存在。转移到50ml离心管中，2500rpm，10min。
2.去上清，假溶血试剂清洗一遍，2500rpm，10min，至无红色存在。
3.去上清，加1ml细胞裂解液，转移到离心管，加20mg/ml蛋白酶K1oml，56度3小时.
4.每管加1ml平衡酚，混匀，6000rpm，10min.
5.重复步骤4.
6.取上清于2mlEP管，加等体积氯仿/异丙醇，混匀，6000rpm，10min.
7.取上清于另一2mlEP管，加NaAc,混匀，加等体积的异丙醇，混匀，可见白色沉淀，10000rpm，5min.
8.去上清，加0.3ml无水乙醇，10000rpm，5min，去酒精，风干。
9.加TE，水浴至DNA溶解，测DNA浓度。
注意事项：
要看一下酚的颜色，一般为黄色，如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。
酚有强腐蚀性，易引起烧伤，一旦皮肤沾染上，应用清水冲洗，用肥皂或稀释的苏打水洗涤，切记不用酒精擦洗。
溶血试剂，细胞裂解液，TE需要高温高压消毒。
核酸因含有共轭的苯环而吸收紫外光，DNA和RNA的最大紫外光吸收波长为260nm。

260nm光吸收值为1时（A260=1），dsDNA的质量浓度相当于50ug/ml，则dsDNA的浓度为： A260 值× 50ug/ml ×稀释倍数

纯度： A260 /A280表示，如果纯的dsDNA的值约为1.8，如果大于1.8，则说明有RNA的污染，如果小于1.8，则说明样品中有蛋白质或饱和酚的污染。

注意点：提取的DNA应该完全溶解后再测其浓度，而且在测浓度的时候，一定要把稀释的样品混匀，不然测得的结果会有大的偏差。

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