复方短效口服避孕药有哪些:微生物培养基质控与图解——培养基氢离子浓度的测定

来源：青岛海博
第二节              培养基氢离子浓度的测定
测定培养基pH的方法很多。常用比色法和pH计法。比色法是利用指示剂在不同pH溶液的颜色变化，与标准比色管（或比色板）相比，得出pH值。它的优点是不受溶液温度的影响，高压后或加热的培养基不必冷却后即可测定，使用方便。精密pH试纸也可测定，方法简便，但数值不够准确。下面介绍标准单管比色液的配制。
配成各种酸碱度的缓冲液，再加入一定量的指示剂（如酚红或溴麝香草酚兰）即成。
两种磷酸盐试剂KH2 P04和Na2 HP04置于105℃干烤3小时。Na2 HP04不易溶解，预先要在乳钵中研细，使用的蒸馏水需高压灭菌或者煮开。配制溶液要使用滴定管和容量瓶。
1．指示剂的配制
(1)酚红( PR)指示剂的配制：精确称取PR0.02克，置于玻璃乳钵中随研随加0.01mol/L氢氧化钠溶液5.46ml，加水至100ml。
(2)溴麝香草酚兰(BTB)指示剂的配制：精确称取BTB0.4克，置于玻璃乳钵中随研随加0.05molNaOH溶液12.8ml，10倍稀释即可。
2．标准比色管的配制
(1)先配制两种磷酸盐溶液：
1液：1/15mol/L的Na2 HP04溶液：称取Na2 HP049.47壳，加蒸馏水至1000ml，溶解混匀。
2液：l/15mol/L的KH2P04溶液：称取KH2 P049.07克，加蒸馏水至1000ml，溶解混匀。
(2)按表中所列配制pH标准管
表1    PR pH标准比色管配制
缓冲液           6.8         7. 0          7. 2         7.4         7.6         7. 8         8.0           8.2           8.4
1液  (ml)       19. 84       24. 44       28. 80      32. 32       34. 80       36. 60       37. 88       38. 80        39. 20
2液 {ml)         20.16      15.56         11.20        7.68          5.20        3.40        2.12         1.20           0.80
l液与2液混合为40ml，分别加入0.02% PR指示剂2ml混匀。分装试管，每管l0ml，封口，121℃高压灭菌20分钟，贴签、装盒。
表2 BTBpH标准比色管配制
缓冲液
6.0
3.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
1液（ml）
12
18
26
37
50
62
73
82
88
2液（ml）
88
82
74
63
50
38
27
18
12
1液与2液混合为100 ml，分别加入0.04%BTB指示刹5ml混匀．，分装试管．每管10ml，封口。121℃高压灭菌20分钟，贴签、装盒。
3．标准pH比色管使用说明
标准pH比色管，共有比色管9支，每管pH间隔0.2，另加蒸馏水1管，并附有比色用空管4支。
比色管的名称          浓度(%)           标准比色范围(pH)
PR指示剂              0.02               6.8 -8.4
BTB指示剂             0.04                6.0 -7.6
酚红( Pnenol red)指示剂的变色范围在pH6.8- 8.4．酸性时为黄色，碱性为粉红色，中性为淡红色。溴麝香草酚蓝( Bromothymol blue)指示剂范围在pH6.0—7.6．酸性时为黄色，碱性为蓝色，中性为黄绿色。在培养基中这两种指示剂应用范围最广。
4．pH的校正
若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正，直至颜色与标
准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加l滴后要充分混匀，比色后再加滴2滴（有
时仅半滴）准确记录加入的量。
目前国外有pH比色盘，适于培养基pH测定。使用更方便，检测数值更准确。
表3培养基常用指示剂及变色范围
指示剂名称
有效pH范围
颜色（酸）
颜色（碱）
麝香草酚蓝（酸域）
1.2-1.8
红
黄
溴酚蓝
3.0-4.6
黄
蓝
溴甲酚绿
3.8-5.4
黄
蓝
甲基红
4.4-6.0
红
黄
氯酚红
4.8-6.4
黄
红
溴甲酚紫
5.2-6.8
黄
紫
溴酚红
5.2-7.0
黄
红
溴麝香草酚蓝
6.0-7.6
黄
蓝
中性红
6.8-8.0
红
黄
蔷薇酸
6.8-8.2
黄
红
酚红
6.8-8.4
黄
红
甲酚红
7.2-8.8
黄
红
麝香草酚蓝（碱域）
8.0-9.6
黄
蓝
酚酞
8.3-10.0
无色
红
石蕊
4.5-8.3
红
蓝
常用指示剂的配制：
最常用的指示剂有溴麝香草酚蓝(BTB)、溴甲酚紫(BP)、酚红(PR)和酸性复红(Andrade)。它们的配制如下。
1．溴麝香草酚蓝指示剂的变色范围为pH6.8—7.7，酸性时为黄色，碱性时为蓝色，中性时为黄绿色，在培养基中应用最广。
(1)称取0.4g溴麝香草酚蓝置研钵中，徐徐加入12.8ml的0.05mrl氢氧化钠，边加边研磨，加完后再充分研磨使全部溶解。
(2)用蒸馏水稀释至100ml，即为0.4%溴麝香草酚蓝指示剂，存棕色试剂瓶内放暗处，备用。滴定培养基的pH时，再用蒸馏水稀释至10倍，为0.04%的溶液。
2．溴甲酚紫指示剂的变色范围为pH5.4~7.0，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
(1)称取0.4g溴甲酚紫置研钵中，徐徐加入13.8ml的0.05 mol氧氧化钠，边加边研磨，加完后再充分研磨使全部溶解。
(2)用蒸馏水稀释至100ml，即为0.4%溴甲酚紫指示剂，存棕色试剂瓶内放暗处，备用。也可配成1.6%的乙醇溶液。
3．酚红指示剂的变色范围为pH6.9—8.5，酸性时为黄色，碱性时为红色，中性时为橘黄或橙色。
(1)称取0.4g酚红置研钵中，徐徐加入23.5m1的0.05mol氢氧化钠，边加边研磨，加完后冉充分研磨使全部溶解。
(2)用蒸馏水稀释至100ml，即为0.4%酚红指示剂，存棕色试剂瓶内放暗处，备用。
滴定时用0.02%的溶液，即用蒸馏水再稀释至20倍。
4．酸性复红指示剂在中性和碱性时无色，酸性时为红色，颜色反应稳定，不会有可疑的结果，故推荐为标准糖发酵管的指示剂。
称取酸性复红0.5g置研钵中，边磨边加蒸馏水约50ml使溶解，再滴加1mol氢氧化钠，边加边混合，使溶液由红色变为棕红色，直至草黄色为止，约需1mol氢氧化钠15~20ml，最后补足蒸馏水至100ml。滴加碱液时，应边加边仔细观察，切勿1次加入过多或过快，以免过量。
表4几种常见菌对pH的适应范围
细菌名称
最低
最高
最适
结核分枝杆菌
6.0
7.6
6.5-6.8
破伤风芽胞梭菌
6.0
8.3
7.0-7.5
溶组织芽胞梭菌
5.0-5.8
8.5-9.0
6.0-7.6
分枝乳杆菌
3.8-4.4
7.2
5.4-6.4
铜绿假单胞杆菌
5.6
8.0
6.6-7.0
大肠埃希菌
4.4
7.8
6.0-7.0
伤寒沙门菌
6.2
8.0
6.8-7.0
肠炎沙门菌
5.0
8.5
7.0-8.0
志贺菌
4.5
8.5
6.4-7.8
布鲁氏菌
6.3
8.4
6.8-7.2
土拉热杆菌
7.2
霍乱弧菌
6.0
9.5
7.6-8.2
表皮葡萄球菌
5.6
8.1
7.4
炭疽芽胞杆菌
6.0
8.5
7.0-7.4
链球菌
5.5
8.0
7.4-7.6
脑膜炎奈瑟菌
6.1
7.8-8.0
7.4 -7.6
酵母菌
2.5
8.0
4.0-5.8
白喉棒状杆菌
6.0
8.3
7.2-7.8
产芽胞梭菌
5.0-5.8
8.5-9.0
6.0-7.6
肉毒芽胞梭菌
5.0
9.0
7.0-7.2
嗜酸乳杆菌
4.0-4.6
6.8
5.8-6.0
产气肠杆菌
4.4
9.0
6.0-7.0
普通变形杆菌
4.4
8.4
6.0-7.0
甲型副伤寒沙门菌
4.5
8.0
6.4-7.2
乙型副伤寒沙门菌
4.5
8.0
6.4-7.2
粪产碱杆菌
6.4
9.7
8.5
鼠疫耶尔森菌
6.6
7.5
6.9-7.1
流感嗜血杆菌
6.2
7.6
7.0
金黄色葡萄球菌
6.6
8.1
7.4
枯草芽胞杆菌
4.5
8.5
6.0-7.6
肺炎链球菌
7.0
8.36
7.6-7.8
化脓性链球菌
6.35
9.2
6.4-8.5
淋病奈瑟菌
6.8
8.3
7.5
真菌
1.5
8.5
3.8-6.0